OECD TG 439
OECD TG 439, Directrices de Pruebas para Pruebas Químicas de la OCDE, Sección 4 (Impacto para la Salud) como parte de "Irritación in vitro de la piel: Método de prueba con epidermis humana reconstruida (rhe)”, i. H "irritación cutánea in vitro: método de prueba con epidermis humana reconstruida (RH)". Se adoptó por primera vez en 2010, se actualizó en 2015 y su alcance se amplió a través de revisiones posteriores. Como parte de los efectos de la salud, es una prueba de toxicidad in vitro y un enfoque que no requiere experimentos con animales.
Nota sobre el estado normativo: TG 439 se encuentra en la UE en el marco de la Reglamento CLP (CE 1272/2008) y ampliamente utilizado por REACH y en el contexto de la prohibición de las pruebas con animales para productos cosméticos. La versión actual y las últimas revisiones del ámbito de aplicación deben revisarse utilizando fuentes oficiales de la OCDE antes del inicio de la investigación.
El principio básico de la prueba es el siguiente:
- La sustancia de prueba se aplica tópicamente a la superficie del tejido epidermis humana reconstruida (RHE). RHE es un modelo de epidermis diferenciado y multicapa que consiste en queratinocitos humanos (p. ej., modelos validados como episkin, epiderm, skinetic rhe, labcyte epi-model, epopecs).
- La duración de la exposición depende de la condición física de la sustancia de prueba: para líquidos, generalmente 15 minutos, sobre los sólidos generalmente 4 horas.
- Después de que haya expirado el tiempo de exposición, se retira la sustancia de prueba del tejido (lavado) y los tejidos se incuban durante un cierto período de tiempo.
- La viabilidad celular se mide con la prueba MTT. MTT se convierte en sal de formazán por las deshidrogenasas mitocondriales de las células vivas; La cantidad de formazán formada es proporcional al número de células vivas.
- El porcentaje de viabilidad celular se calcula en comparación con los tejidos de control negativo.
- El resultado se interpreta utilizando umbrales validados: si la viabilidad es ≤ 50%, la sustancia se clasifica como irritante (categoría 2); A > 50%, se considera no irritante.
- Si es necesario, la validación se puede llevar a cabo con un segundo modelo RHE o marcadores adicionales (por ejemplo, liberación de IL-1α, IL-8).
TG 439 es parte de la Estrategia de prueba secuencial. En primer lugar, las propiedades fisicoquímicas (por ejemplo, pH ≤ 2 o ≥ 11,5) y Pruebas de corrosividad in vitro (TG 430, TG 431) clasificado; En el caso de sustancias no corrosivas, el efecto irritante se evalúa según el TG 439. Este enfoque forma parte de la OECD TG 404 Definió la estrategia secuencial y hace que las pruebas in vivo sean en gran medida superfluas.
Los parámetros clave reportados en el estudio son:
- El modelo RHE utilizado e información de fabricante y validación
- Estado agregado de la sustancia de prueba (líquido/sólido) y la cantidad de aplicación
- Duración de la exposición (15 min para líquidos; 4 horas para sólidos) y condiciones de uso
- Después de la exposición tiempo de incubación y proceso de lavado
- Viabilidad celular (%) (para cada tejido paralelo) y promedio
- Resultados de los controles positivos (por ejemplo, SDS, estimulantes químicamente conocidos) y negativos
- Confirmación de que los controles cumplen con los criterios de validez
- Resultado: Irritable (categoría 2) / No irritante - Evaluación y justificación
- Datos sobre incertidumbre de medición y repetibilidad
¿Cuál es el propósito de la investigación?
La OCDE TG 439 se realiza con los siguientes fines científicos y regulatorios:
- Determinación del potencial de estímulo dérmico: Evaluación del potencial de una sustancia para causar irritación reversible después del contacto con la piel
- Clasificación de GHS/CLP: Determinar si la sustancia se clasificará como irritante cutánea Categoría 2 e identificación de los requisitos de etiquetado (H315)
- Protección animal (3R): Como alternativa a la prueba de irritación cutánea in vivo (TG 404), se evita el uso de animales; Cumplimiento de la prohibición de pruebas en animales para productos cosméticos
- Estrategia de prueba en etapa: Finalización de la evaluación de la irritación in vitro después de las pruebas de corrosividad (TG 430, TG 431)
- Apoyo a los documentos de registro: Uso en evaluaciones de seguridad de REACH, biocidas, pesticidas, cosméticos y productos químicos industriales
- Producto y etiquetado: Definición de advertencias y medidas de seguridad para proteger a los consumidores y empleados
- Formulación y desarrollo de materiales: Detección temprana de nuevos productos y materiales
- Evidencia aproximada: Contribución a la evaluación holística de la sustancia en relación con otros datos físico-químicos, in vitro e in vivo
La OCDE TG 439 solo proporciona una evaluación irritante; Corsity (TG 430, TG 431), Sensibilización (serie TG 442), Toxicidad sistémica y Fototoxicidad No entran dentro del alcance de este estándar. Además, los modelos RHE no reflejan completamente el grosor total de la piel humana (incluida la dermis) ni las reacciones sistémicas. Los resultados deben interpretarse en relación con las propiedades fisicoquímicas de la sustancia y otros datos toxicológicos.
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