EP 2.6.14

EP 2.6.14, Farmacopea Europea (Ph. Eur.) La Sección 2.6 (Exámenes Biológicos) contiene el método general de "Endotoxina bacteriana", D. marido "Endotoxinas bacterianas". La sección describe los procedimientos de prueba con Lisado de amobocitos de limulo (LAL) para determinar Lipopolisacáridos (endotoxinas)que provienen de la pared celular de las bacterias gramnegativas.

Armonización y normas relevantes: La sección está armonizada con USP <85> (prueba de endotoxinas bacterianas) y JP 4.01; Los principios de los métodos, los requisitos de validación y los criterios de aceptación son en gran medida idénticos. Las referencias fuera de la farmacopea incluyen ISO 10993-11 (valor de la pirogenidad relacionada con el material en dispositivos médicos) y USP <161> (conjuntos de contactos de sangre/solvente); Estos estándares también se tienen en cuenta en la detección de endotoxinas de dispositivos médicos.

Principio fundamental

LAL es un lisado obtenido de los amobocitos de los dardos del dardo (Limulus polifemus o tachypleus tridentatus), que es una cascada de coagulación desencadenadores enzimáticos. Dependiendo del método, esta cascada se mide en forma de formación de gel, cambio de turbidez o formación de color. La precisión de la prueba se determina mediante la indicación de la sensibilidad del lisado (λ, EU/ml), la calibración de endotoxina estándar (CSE/RSE) y el control de interferencia garantizado.

Métodos

EP 2.6.14 define cuatro grupos de métodos básicos:

Método de gel-clot: Prueba de límite y método semicuantitativo; Evaluación visual de la formación de gel en una mezcla de endotoxinas de lisado. Este es el método más utilizado como método de referencia.
Método turbidimétrico: Medición fotométrica del cambio de turbidez debido a la coagulación; Modo cinético o de punto final
Método cromogénico: Medición fotométrica del producto coloreado creado por degradación de un sustrato sintético por la cascada de coagulación; Modo cinético o de punto final
Método de coágulo de gel semicuantitativo: Test de límite multidiluido avanzado

Cálculos y términos importantes

Valor límite de endotoxina (EL): Valor límite monográfico (p. ej., fórmula K/M para productos parenterales; K = dosis umbral pirogénica, M = dosis humana máxima por kg por hora)
Dilución válida máxima (dilución válida máxima, MVD): MVD = (El × Concentración de la muestra) / λ
λ (lambda): Sensibilidad especificada del lisado (EU/ml)
CSE (endotoxina estándar de control): Contra el estándar de control calibrado de RSE (endotoxina estándar de referencia) para endotoxinas
PPC (Control positivo del producto): Confirmación de la recuperación de una cantidad conocida de endotoxina en la muestra; Evaluación de interferencia (inhibición/potenciación)
Prueba de interferencia (prueba de factores de interferencia): Debe realizarse para cada producto en la fase de validación; Eliminación de la interferencia mediante la dilución apropiada o el ajuste del método

Los parámetros básicos reportados en el estudio son:

Descripción del producto, Límite de endotoxina (EL) y su base (monografía/fórmula)
Usado Método LAL (Agregado en Gel, Turbidimétrico, Cromógeno) y Modo
Lote de Lysat, Valor λ e Información del fabricante
Calibración CSE/RSE y datos de validación
MVD y diluciones aplicadas
Resultados de la prueba de interferencia (recuperación de PPC, rango de aceptación)
Resultados del control negativo y positivo
Encuentro de muestra y Comparación con El
Edición Pharmacopoeia usada (edición Ph. Eur.) y versión de capítulo
Datos de incertidumbre de medición y repetibilidad

¿Para qué es esto?

El documento EP 2.6.14 se utiliza para los siguientes fines científicos y regulatorios:

Seguridad de los productos parentales: Detección de que la contaminación por endotoxinas en preparaciones de inyección, soluciones de infusión, colirios y otros productos farmacéuticos está dentro de los límites
Conformidad de la farmacopea: Implementación de la prueba legal para productos para los que las monografías de Ph. EUR pretenden ser una prueba de endotoxina
Evaluación de dispositivos médicos: Evaluación de la pirogenidad y endotoxinas relacionadas con el material para productos que entran en contacto con sangre o soluciones (por ejemplo, conjuntos de infusión, catéteres, implantes) (en relación con ISO 10993-11 y USP <161>)
Materia prima y control de procesos: Monitorización de carga de endotoxinas de agua (agua purificada, agua para inyección), materias primas y componentes de envasado en la fabricación farmacéutica
Esterilización y validación de procesos: Demostrar la eficacia de los procedimientos de depirogenización
Control de calidad y liberación: Producción de muchas endotoxinas antes del lanzamiento al mercado
Markech e Inspección: Comprobante del cumplimiento de la farmacopea en la inspección por parte de las autoridades competentes
Protección animal (3R): Uso de la prueba LAL como alternativa a la prueba de pirógeno de conejo (EP 2.6.8)
Evidencia aproximada: Contribución a la evaluación de seguridad holística del producto en relación con datos sobre esterilidad, biocompatibilidad y pirogenicidad

EP 2.6.14 Acepta solo endotoxinas bacterianas; Pirogenidad material (pirogénica no endotóxica) y contaminación microbiana No entran dentro del alcance de esta prueba y deben usarse con los métodos apropiados (EP 2.6.8 Prueba pirogénica de conejo, prueba de esterilidad).

Como nanotest, realizamos las pruebas de endotoxina bacteriana de acuerdo con EP 2.6.14 como parte de nuestra infraestructura de laboratorio acreditada y nuestro sistema de gestión de calidad con atención científica.

Para obtener información sobre la selección de métodos, la validación y la prueba de enema, el cálculo de MVD, las condiciones de aceptación de la muestra, el plan de prueba y los procesos de notificación de sus pruebas de endotoxina bacteriana de acuerdo con EP 2.6.14, póngase en contacto con NanoTest.

Normas