OECD TG 439

OECD TG 439

OECD TG 439, OECD-Prüfrichtlinien für die Prüfung von Chemikalien, Abschnitt 4 (Gesundheitliche Auswirkungen) im Rahmen der „In-vitro-Hautreizung: Testmethode mit rekonstruierter menschlicher Epidermis (RhE)“, d. h. „In-vitro-Hautreizung: Testmethode mit rekonstruierter menschlicher Epidermis (RhE)“. Er wurde erstmals im Jahr 2010 verabschiedet, 2015 aktualisiert und durch nachfolgende Überarbeitungen wurde sein Anwendungsbereich erweitert. Im Rahmen der gesundheitlichen Auswirkungen handelt es sich um einen In-vitro- Toxizitätstest und um einen ansatz, der ohne Tierversuche auskommt.

Hinweis zum regulatorischen Status: TG 439 wird in der EU im Rahmen der CLP-Verordnung (EG 1272/2008) und von REACH sowie im Rahmen des Verbots von Tierversuchen für Kosmetikprodukte weit verbreitet eingesetzt. Die aktuelle Fassung und die neuesten Überarbeitungen zum Anwendungsbereich sollten vor Beginn der Untersuchung anhand offizieller OECD-Quellen überprüft werden.

Das Grundprinzip des Tests lautet wie folgt:

• Die Testsubstanz wird topisch auf die Oberfläche des Gewebes rekonstruierter menschlicher Epidermis (RhE) aufgetragen. RhE ist ein mehrschichtiges und differenziertes Epidermis-Modell, das aus menschlichen Keratinozyten besteht (z. B. validierte Modelle wie EpiSkin, EpiDerm, SkinEthic RHE, LabCyte EPI-MODEL, epiCS).
• Die Expositionsdauer hängt vom physikalischen Zustand der Testsubstanz ab: bei Flüssigkeiten in der Regel 15 Minuten, bei Feststoffen in der Regel 4 Stunden.
• Nach Ablauf der Expositionszeit wird die Testsubstanz vom Gewebe entfernt (Abwaschen) und die Gewebe werden noch eine bestimmte Zeit lang inkubiert.
• Die Zellviabilität wird mit dem MTT-Test gemessen. MTT wird von den Mitochondrien-Dehydrogenasen lebender Zellen in Formazansalz umgewandelt; die Menge des gebildeten Formazans ist proportional zur Anzahl der lebenden Zellen.
• Der Prozentsatz der Zellviabilität wird im Vergleich zu den Negativkontrollgeweben berechnet.
• Das Ergebnis wird anhand validierter Schwellenwerte interpretiert: Liegt die Lebensfähigkeit bei ≤ 50 %, wird die Substanz als reizend (Kategorie 2) eingestuft; bei > 50 % gilt sie als nicht reizend.
• Bei Bedarf kann eine Validierung mit einem zweiten RhE-Modell oder zusätzlichen Markern (z. B. IL-1α-, IL-8-Freisetzung) durchgeführt werden.

TG 439 ist Teil der sequenziellen Teststrategie. Zunächst werden die physikalisch-chemischen Eigenschaften (z. B. pH-Wert ≤ 2 oder ≥ 11,5) sowie In-vitro-Korrosivitätstests (TG 430, TG 431) bewertet; bei nicht korrosiven Stoffen erfolgt die Bewertung der Reizwirkung gemäß TG 439. Dieser Ansatz ist Teil der in OECD TG 404 definierten sequenziellen Strategie und macht In-vivo-Tests weitgehend überflüssig.

Die in der Studie berichteten Schlüsselparameter sind:

• Das verwendete RhE-Modell sowie Hersteller- und Validierungsinformationen
• Aggregatzustand der Testsubstanz (flüssig/fest) und die Anwendungsmenge
• Expositionsdauer (15 min für Flüssigkeiten; 4 Stunden für Feststoffe) und Anwendungsbedingungen
• Nach der Exposition Inkubationszeit und Waschverfahren
• Zellviabilität (%) (für jedes Parallelgewebe) und Durchschnittswert
• Ergebnisse der positiven (z. B. SDS, chemisch bekanntes Reizmittel) und negativen Kontrollen
• Bestätigung, dass die Kontrollen die Validitätskriterien erfüllen
• Ergebnis: reizend (Kategorie 2) / nicht reizend – Bewertung und Begründung
• Daten zur Messunsicherheit und Wiederholbarkeit

Wozu dient die Untersuchung?

Die OECD TG 439 wird für die folgenden wissenschaftlichen und regulatorischen Zwecke durchgeführt:

• Bestimmung des dermalen Reizpotenzials: Bewertung des Potenzials eines Stoffes, nach Hautkontakt eine reversible Reizung hervorzurufen
• GHS/CLP-Einstufung: Feststellung, ob der Stoff als hautreizend Kategorie 2 einzustufen ist, und Ermittlung der Kennzeichnungsanforderungen (H315)
• Tierschutz (3R): Als Alternative zum In-vivo-Draize-Hautreizungstest (TG 404) wird der Einsatz von Tieren vermieden; Einhaltung des Verbots von Tierversuchen für Kosmetikprodukte
• Stufenweise Teststrategie: Abschluss der Reizungsbewertung in vitro nach Korrosivitätstests (TG 430, TG 431)
• Unterstützung bei Zulassungsunterlagen: Einsatz bei Sicherheitsbewertungen im Rahmen von REACH, für Biozide, Pflanzenschutzmittel, Kosmetika und Industriechemikalien
• Produktsicherheit und Kennzeichnung: Festlegung von Warnhinweisen und Sicherheitsmaßnahmen zum Schutz von Verbrauchern und Mitarbeitern
• Formulierungs- und Materialentwicklung: Früherkennung neuer Produkte und Materialien
• Ansatz der Beweiskraft: Beitrag zur ganzheitlichen Bewertung des Stoffes in Verbindung mit anderen physikalisch-chemischen, in-vitro- und in-vivo-Daten

OECD TG 439 liefert lediglich eine Reizungsbewertung; Korrosivität (TG 430, TG 431), Sensibilisierung (TG 442-Reihe), systemische Toxizität und Phototoxizität fallen nicht in den Geltungsbereich dieser Norm. Zudem spiegeln RhE-Modelle weder die volle Dicke der menschlichen Haut (einschließlich der Dermis) noch systemische Reaktionen vollständig wider. Die Ergebnisse sollten im Zusammenhang mit den physikalisch-chemischen Eigenschaften des Stoffes und anderen toxikologischen Daten interpretiert werden.

Als NanoTest führen wir die In-vitro-Hautreizungstests gemäß OECD TG 439 im Rahmen unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems mit wissenschaftlicher Sorgfalt durch.

Für Informationen zur Planung einer sequenziellen Teststrategie, zur Auswahl des RhE-Modells, zur Anwendungs- und Messstrategie, zu den Bedingungen für die Probenannahme, zum Testzeitplan und zu den Berichtsprozessen für Ihre In-vitro-Hautreizungstests gemäß OECD TG 439 können Sie sich gerne an NanoTest wenden.