OCSE TG 471

OECD TG 471, linee guida per il test dell'OCSE per i test chimici, Sezione 4 (Effetti sulla salute) come parte del Test di mutazione inversa batterica”, I. H di Mutazioni inverse batteriche test; questo è comunemente noto come AMES TEST. È stato adottato per la prima volta nel 1983 e aggiornato nel 1997. Il test è un test di genotossicità in vitro per valutare il potenziale di una sostanza per innescare una mutazione posteriore in batteri.

Il principio di base del test è il seguente:

Il test utilizza ceppi di mutanti batterici auxotrofici che non possono sintetizzare un particolare amminoacido (ad es. istidina o triptofano). Questi ceppi non possono moltiplicarsi su un mezzo nutritivo minimo senza aminoacidi.
La sostanza in esame viene applicata a questi ceppi. Quando la sostanza in esame provoca una mutazione posteriore, i batteri sono nuovamente in grado di sintetizzare l'amminoacido e moltiplicarsi attraverso la formazione di colonie sul terreno minimo.
Un aumento del tasso di rimutazione è un indicatore del potenziale mutageno della sostanza in esame.
Il test viene eseguito sia in presenza che in assenza di attivazione metabolica (mix S9). La frazione S9 (di solito indotta con fegato di ratto fenobarbitale e β-naphthoflavon indotto dal fegato di ratto) imita il metabolismo dei mammiferi, consentendo così il rilevamento di sostanze (promutagene) in condizioni in vivo vengono convertite in metaboliti e quindi Agire mutageni.

I ceppi di prova comunemente usati includono:

Salmonella Typhimurium: TA98, TA100, TA1535, TA1537 (o TA97A/TA97), TA102 – ogni ceppo è sensibile a un diverso tipo di mutazione (frameshift, cambio di coppia di basi, danno ossidativo, ecc.).
Escherichia coli: WP2 UVRA (o WP2 UVRA PKM101) - è utilizzato in particolare per i cambiamenti delle coppie di basi e il danno ossidativo.
Si consiglia di utilizzare almeno cinque ceppi (quattro S. typhimurium + an E. coli); Se necessario, possono essere aggiunti ceppi aggiuntivi.

Metodi di prova:

Metodo di incorporazione della piastra (incorporazione di conchiglie di Petri): la sostanza in esame viene versata in una capsula di Petri insieme ai batteri e all'agar dello strato superiore. Questa è una procedura comune e standardizzata.
Metodo di pre-incubazione: La sostanza in esame e i batteri vengono sottoposti a una breve pre-incubazione (di solito 20-30 minuti) in presenza di S9 e poi versata in una capsula di Petri insieme all'agar dello strato superiore. È particolarmente preferito per sostanze volatili e metaboliti a vita breve.
Se necessario, possono essere utilizzati essiccatori o permeabili al gas per volatili.

I parametri di base riportati nello studio sono:

I stein utilizzati e le loro proprietà genetiche (tipo di mutazione, fattore R, stato UVRA/UVRB, mutazione della parete RFA)
Usato metodo (incorporazione di piastre o pre-incubazione)
Concentrazioni testate (di solito almeno 5 concentrazioni)
Stato dell'attivazione metabolica di S9 (+S9 / −S9) e concentrazione di S9
Per ogni ceppo e concentrazione numero di colonie di mutazione posteriore (revertante/piastra)
Risultati del controllo negativo (solvente) e controllo positivo
Rapporto sugli effetti della dose e valutazione statistica
Citotossicità della sostanza in esame (diminuzione del prato di fondo, riduzione delle colonie, ecc.)
Risultato: valutazione come mutagen / non mutageno e giustificazione
Dati su incertezza di misura e ripetibilità

Perché il test è fatto?

La linea guida per il test dell'OCSE 471 viene eseguita per i seguenti scopi scientifici e normativi:

Determinazione del potenziale mutageno: Determinazione del potenziale della sostanza in esame per causare mutazioni alla schiena nel DNA batterico
Determinazione del rischio genotossico: rilevamento precoce di sostanze che causano danni al DNA; Fornitura di uno screening relativo al potenziale di cancerogenicità
Fornitura di dati preliminari per test in vivo: Creare una base per il follow-up dei risultati in vitro positivi attraverso test di genotossicità in vivo (ad es. TG 474, TG 475)
Rilevamento di promutazioni: Identificazione delle sostanze attivate nel metabolismo dei mammiferi mediante il sistema di metabolizzazione S9
Domande per richieste di autorizzazione: Utilizzo nelle valutazioni di sicurezza REACH e biocidi, pesticidi, farmaceutici, cosmetici e additivi alimentari
Componente principale della batteria del test di genotossicità: Inclusione come test iniziale nelle strategie ufficiali del test di genotossicità
Prove approssimative: Contributo alla valutazione olistica della sostanza in combinazione con altri test di genotossicità, dati fisico-chimici e valutazione dell'esposizione
Priorità: Screening di un gran numero di sostanze e priorità per ulteriori test

OCSE TG 471, non fornisce una chiara conoscenza della cancerogenicità o della genotossicità nei mammiferi di per sé. I sistemi di test batterici differiscono dalle cellule di mammifero (metabolismo, riparazione del DNA, struttura cromosomica). I risultati devono essere interpretati in combinazione con altri test di genotossicità in vitro e in vivo, nonché una valutazione dell'esposizione.

Come nano test, eseguiamo i test di mutazione della schiena batterica in conformità con l'OCSE TG 471 come parte della nostra infrastruttura di laboratorio accreditata e il nostro sistema di gestione della qualità con cura scientifica. Il nostro ambito di servizi include quanto segue:

Pianificazione degli esperimenti e creazione del protocollo

Creazione di un protocollo di studio secondo l'OCSE TG 471
Selezione del metodo adatto (incorporazione o pre-incubazione) in base alle proprietà fisico-chimiche della sostanza in esame (solubilità, volatilità, stabilità)
Selezione di un solvente adatto (veicolo) e valutazione della solubilità/stabilità
La giustificazione scientifica del Intervallo di concentrazione e livelli di dosaggio
Selezione di ceppi e verifica delle loro proprietà genetiche
Pianificazione di un controllo negativo (solvente) e di idonei controlli positivi
Rispetto dei requisiti etici e amministrativi (compresa la sicurezza microbiologica)

Per informazioni sulla progettazione dello studio, la selezione del master e del metodo, la pianificazione dell'attivazione metabolica S9, le condizioni di accettazione del campione, il programma di test e i processi di segnalazione per i test di mutazione della schiena batterica secondo l'OCSE TG 471, puoi contattare il nano-test turn

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