OCDE TG 471

OCDE TG 471

OCDE TG 471, Directrices de prueba de la OCDE para pruebas químicas, Sección 4 (Efectos para la salud) como parte de la "Prueba de mutación inversa bacteriana", D. H des Pruebas de mutación de espalda bacteriana; Esto generalmente se considera Prueba de Ames conocido Fue adoptado por primera vez en 1983 y actualizado en 1997. La prueba es una in vitro-Prueba de genotoxicidad para evaluar el potencial de una sustancia para desencadenar una mutación posterior en las bacterias.

El principio básico de la prueba es el siguiente:

• La prueba utiliza Cepas mutantes bacterianas auxotróficasque no puede sintetizar un aminoácido en particular (por ejemplo, histidina o triptófano). Estas cepas no pueden multiplicarse en un medio nutriente mínimo sin aminoácidos.
• La sustancia de prueba se aplica a estas cepas. Cuando la sustancia de prueba causa una mutación posterior, las bacterias pueden volver a sintetizar el aminoácido y multiplicarse a través de la formación de colonias en el medio mínimo.
• Un aumento en la tasa de remutación es un indicador del potencial mutágeno de la sustancia de prueba.
• La prueba se realiza tanto en presencia como en ausencia de activación metabólica (S9 Mix). La fracción S9 (generalmente inducida con fenobarbital e hígado de rata inducido por β-naftoflavon) imita el metabolismo de los mamíferos, lo que permite la detección de sustancias (promutagene) en condiciones in vivo se convierten en metabolitos y así actuar mutágenos.

Las cepas de prueba de uso común incluyen:

• Salmonella typhimurium: TA98, TA100, TA1535, TA1537 (o TA97A/TA97), TA102: cada cepa es sensible a un tipo diferente de mutación (cambio de marco, cambio de par de bases, daño oxidativo, etc.).
• Escherichia coli: WP2 UVRA (o WP2 UVRA PKM101) - se utiliza en particular para cambios de pares de bases y daño oxidativo.
• Se recomienda usar al menos cinco cepas (cuatro S. typhimurium + una E. coli); Se pueden agregar cepas adicionales si es necesario.

Métodos de prueba:

• Método de incorporación de placas (Incorporación de cáscara de Petri): La sustancia de prueba se vierte en una placa de Petri junto con las bacterias y el agar capa superior. Este es un procedimiento común y estandarizado.
• Método de preincubación: La sustancia de prueba y las bacterias se someten a una breve preincubación (generalmente de 20 a 30 minutos) en presencia de S9 y luego se vierte en una placa de Petri junto con la capa superior de agar. Es particularmente preferido para sustancias volátiles y metabolitos de corta duración.
• Si es necesario, se pueden utilizar desecadores o permeable al gas para volátiles.

Los parámetros básicos reportados en el estudio son:

• Los Steins utilizados y sus propiedades genéticas (tipo de mutación, factor R, estado de UVRA/UVRB, mutación de pared RFA)
• Usado método (incorporación de placa o preincubación)
• Probadas concentraciones (generalmente al menos 5 concentraciones)
• Estado de activación metabólica de S9 (+S9 / −S9) y concentración de S9
• Para cada cepa y concentración número de colonias de mutación de espalda (revertidora/placa)
• Resultados del control negativo (solvente) y control positivo
• Relación de efecto de dosis y evaluación estadística
• Citotoxicidad de la sustancia de ensayo (disminución del césped de fondo, reducción de colonias, etc.)
• Resultado: evaluación como mutágeno / no mutágeno y justificación
• Datos sobre incertidumbre de medición y repetibilidad

¿Por qué se realiza la prueba?

La directriz 471 de prueba de la OCDE se realiza con los siguientes fines científicos y regulatorios:

• Determinación del potencial mutagénico: Determinación del potencial de la sustancia de prueba para causar mutaciones de espalda en el ADN bacteriano
• Determinación del riesgo genotóxico: Detección temprana de sustancias que causan daño al ADN; Disposición de un cribado relacionado con el potencial de carcinogenicidad
• Provisión de datos preliminares de la prueba in vivo: Crear una base para el seguimiento de resultados in vitro positivos mediante pruebas de genotoxicidad in vivo (p. ej., TG 474, TG 475)
• Detección de promutages: Identificación de sustancias activadas en el metabolismo de mamíferos por el sistema de metabolización S9
• Asistencia con solicitudes de admisión: Uso en evaluaciones de seguridad de alcance, biocidas, pesticidas, productos farmacéuticos, cosméticos y aditivos alimentarios
• Componente central de la batería de prueba de genotoxicidad: Inclusión como prueba inicial en estrategias oficiales de prueba de genotoxicidad
• Evidencia aproximada: Contribución a la evaluación holística de la sustancia junto con otras pruebas de genotoxicidad, datos físico-químicos y evaluación de la exposición
• Priorización: Detección de una gran cantidad de sustancias y priorización para pruebas adicionales

OCDE TG 471, No proporciona un conocimiento claro de carcinogenicidad o genotoxicidad en mamíferos per se Los sistemas de pruebas bacterianas difieren de las células de los mamíferos (metabolismo, reparación del ADN, estructura cromosómica). Los resultados deben interpretarse junto con otras pruebas de genotoxicidad in vitro e in vivo, así como una evaluación de la exposición.

Como prueba nano, realizamos las pruebas de mutación bacteriana de espalda de acuerdo con la OCDE TG 471 como parte de nuestra infraestructura de laboratorio acreditada y nuestro sistema de gestión de calidad con atención científica. Nuestro alcance de servicios incluye lo siguiente:

Planificación de experimentos y creación del protocolo

• Creación de un Protocolo de estudio según la OCDE TG 471
• Selección del método adecuado (incorporación de placa o preincubación) según las propiedades fisicoquímicas de la sustancia de ensayo (solubilidad, volatilidad, estabilidad)
• Selección de un disolvente (vehículo) adecuado y evaluación de solubilidad/estabilidad
• Justificación científica de Rango de concentración y niveles de dosis
• Selección de cepas y verificación de sus propiedades genéticas
• Planificación de un control negativo (solvente) y controles positivos adecuados
• Cumplimiento de los requisitos éticos y administrativos (incluida la seguridad microbiológica)

Para obtener información sobre el diseño del estudio, la selección del maestro y el método, la planificación de la activación metabólica de S9, las condiciones de aceptación de la muestra, el cronograma de prueba y los procesos de notificación de sus pruebas de mutación de espalda bacteriana de acuerdo con la OECD TG 471, puede comunicarse con Nano-Test Turn