EP 2.6.14

EP 2.6.14, Farmacopea europea (ph. Eur.) La sezione 2.6 (test biologici) contiene il metodo generale per "endotossine batteriche", i. H "endotossine batteriche". La sezione descrive le procedure di test con limulo amobocita lisato (LAL) per la determinazione di lipopolisaccaridi (endotossine), che sono derivati dalla parete cellulare dei batteri gram-negativi.

Armonizzazione e norme pertinenti: la sezione è armonizzata con USP <85> (test delle endotossine batteriche) e JP 4.01; I principi dei metodi, i requisiti di convalida ei criteri di accettazione sono in gran parte identici. I riferimenti al di fuori della farmacopea includono ISO 10993-11 (valore della pirogenesi correlata al materiale nei dispositivi medici) e USP <161> (set di contatti sangue/solvente); Questi standard sono presi in considerazione anche nel rilevamento delle endotossine dei dispositivi medici.

Principio di base

Lal è un lisato ottenuto dagli amobociti delle dardi del dardo (Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus), che è un enzimatico innesca cascata di coagulazione. A seconda del metodo, questa cascata viene misurata sotto forma di formazione di gel, cambiamento di torbidità o formazione di colore. L'accuratezza del test è determinata dalla indicazione della sensibilità del lisato (λ, eu/ml), dalla calibrazione standard dell'endotossina (CSE/RSE) e dal controllo dell'interferenza garantito.

Metodi

EP 2.6.14 Definisce quattro gruppi di metodi di base:

Metodo del coagulo gel: test limite e metodo semiquantitativo; Valutazione visiva della formazione di gel in una miscela di endotossine di lisato. Questo è il metodo più utilizzato come metodo di riferimento.
Metodo torbidimetrico: Misurazione fotometrica del cambiamento di torbidità dovuta alla coagulazione; Modalità cinetica o endpoint
Metodo cromogenico: Misurazione fotometrica del prodotto colorato creato per degradazione di un substrato sintetico mediante cascata di coagulazione; Modalità cinetica o endpoint
Metodo semiquantitativo del coagulo di gel: test limite multi-diluito avanzato

Calcoli e termini importanti

Valore limite di endotossine (EL): Valore limite monografico (ad es. Formula k/m per prodotti parenterali; k = dose soglia pirogenica, m = dose massima umana per kg all'ora)
Massima diluizione valida (diluizione massima valida, MVD): MVD = (el × concentrazione del campione) / λ
λ (Lambda): Sensibilità specificata del lisato (EU/ml)
CSE (controllo standard endotossina): contro lo standard di controllo calibrato RSE (reference standard endotossina) per le endotossine
PPC (controllo positivo del prodotto): conferma del recupero di una quantità nota di endotossina nel campione; Valutazione dell'interferenza (inibizione/potenziamento)
Test di interferenza (test per fattori interferenti): deve essere eseguito per ogni prodotto in fase di convalida; Eliminazione dell'interferenza mediante diluizione appropriata o aggiustamento del metodo

I parametri di base riportati nello studio sono:

Descrizione del prodotto, limite di endotossine (EL) e sua base (monografo/formula)
Metodo LAL (aggregato gel, turbidimetrico, cromogeno) e modalità
Lotto Lysat, valore λ e informazioni sul produttore
Calibrazione CSE/RSE e dati di convalida
MVD e diluizioni applicate
Risultati dei test di interferenza (recupero PPC, intervallo di accettazione)
Risultati del controllo negativo e positivo
Risultati del campione e confronto con EL
Edizione farmacopea usata (Edizione Ph. Eur.) e versione capitolo
Dati di incertezza di misurazione e ripetibilità

A cosa serve?

Il PE 2.6.14 viene utilizzato per i seguenti scopi scientifici e normativi:

Sicurezza dei prodotti parentali: Rilevamento che la contaminazione da endotossine nei preparati iniettabili, soluzioni per infusione, collirio e altri prodotti farmaceutici rientra nei limiti
Farmacopea Conformità: Attuazione del test di legge per i prodotti per i quali le monografie di Ph. EUR sono destinate ad essere un test di endotossine
Valutazione del dispositivo medico: Valutazione della pirogenicità ed endotossine legate al materiale per i prodotti che entrano in contatto con sangue o soluzioni (ad es. set per infusione, cateteri, impianti) (in connessione con ISO 10993-11 e USP <161>)
Materiale grezzo e controllo di processo: Monitoraggio del carico endotossinico di acqua (acqua purificata, acqua per iniezione), materie prime e componenti di imballaggio nella produzione farmaceutica
Sterilizzazione e convalida del processo: dimostrando l'efficacia delle procedure di depirogenizzazione
Controllo di qualità e rilascio: Produzione Lotti di endotossine prima del lancio sul mercato
Marketch e ispezione: Prova della conformità alla farmacopea all'ispezione da parte delle autorità competenti
Protezione animale (3R): Uso del test LAL in alternativa al test del pirogeno di coniglio (EP 2.6.8)
Prove approssimative: Contributo alla valutazione olistica della sicurezza del prodotto in relazione a dati su sterilità, biocompatibilità e pirogenicità

EP 2.6.14 Accetta solo endotossine batteriche; Pirogenesi materiale (non endotossico pirogenico) e contaminazione microbica non rientrano nell'ambito di questo test e devono essere utilizzati con i metodi appropriati (EP 2.6.8 Test pirogenico di coniglio, sterilità prova).

Come nanotest, eseguiamo i test di endotossina batterica in conformità con EP 2.6.14 come parte della nostra infrastruttura di laboratorio accreditata e il nostro sistema di gestione della qualità con cura scientifica.

Per informazioni sulla selezione del metodo, la convalida e il test del clistere, il calcolo MVD, le condizioni di accettazione del campione, il piano di test e i processi di segnalazione per i test endotossine batteriche in conformità con EP 2.6.14, contattare NanoTest.

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