EN ISO 10993-5
ISO 10993-5 es una norma publicada por la Organización Internacional de Normalización (ISO) y adoptada por el Comité Europeo de Normalización (CEN) titulado "Evaluación Biológica de Dispositivos Médicos - Parte 5: Exámenes para in vitro citotoxicidad”, i. H "Evaluación biológica de dispositivos médicos - Parte 5: Pruebas in vitro-citotoxicidad".
Estado Regulatorio y Nota de Release: El texto básico de la norma es ISO 10993-5:2009 (tercera edición) y se llamó ISO a nivel europeo 10993-5:2009 Aceptado. Se agregó el cambio A11:2025 al estándar y la versión consolidada actual EN ISO 10993-5:2009+A11:2025 está vigente (el 29 de enero de 2025 Aprobado por CEN, publicado en la primavera de 2025)[Referencia:0] [Referencia:1]. El cambio A11 actualiza el estado del estándar como estándar armonizado al agregar el anexo ZA en el marco del MDR (2017/745). El alcance del reconocimiento de la FDA debe verificarse antes de presentar la solicitud.
El principio básico de la norma es la evaluación del potencial citotóxico de los dispositivos médicos o los materiales componentes en sistemas de cultivo celular. Esto se considera el el primer paso y obligatorio de la serie de pruebas de biocompatibilidad; Permite la determinación del efecto tóxico a nivel celular antes de proceder con pruebas in vivo[Referencia:3].
El alcance de la norma incluye tres modelos básicos de contacto:
1. Método de extracción (método de extracto)
El material de ensayo se extrae bajo ciertas condiciones (temperatura, duración, relación superficie-volumen) en un medio de extracción adecuado (preferiblemente medio de cultivo celular que contiene suero; alternativamente solución salina fisiológica, DMSO, etc.). El extracto obtenido se aplica al cultivo celular. Las condiciones para la preparación del extracto se realizan de acuerdo con ISO 10993-12[Referencia:4][Referencia:5]. Este método es el enfoque más utilizado para evaluar el potencial tóxico de las sustancias que se pueden liberar del producto.
2. Procedimientos de contacto indirecto (contacto indirecto)
El material de prueba se expone al cultivo celular de tal manera que no entre en contacto directo con las células (por ejemplo, por difusión sobre una capa de agar o colágeno). Este método se utiliza en particular para evaluar el potencial de componentes de bajo peso molecular para ingresar a las células por difusión.
3. Método de contacto directo (contacto directo)
El material de prueba se aplica directamente a la capa de celda. Este método es adecuado para materiales sólidos y dispositivos con propiedades superficiales distintas. Permite la evaluación de la interacción directa entre la superficie del material y las células.
Líneas celulares utilizadas
La norma permite el uso de diferentes líneas celulares. Las líneas celulares de uso común incluyen [Referencia:6]:
- L929 (fibroblastos del tejido conectivo del ratón) - la línea celular más utilizada[Referencia:7]
- Clon A31 de BALB/3T3 (fibroblastos del embrión de ratón)
- V79 (fibroblastos de pulmón de hámster chino)
- Si es necesario, células primarias de origen humano (por ejemplo, fibroblastos dérmicos humanos) u otras líneas celulares adecuadas
Métodos para medir la viabilidad celular / citotoxicidad
El estándar ofrece varios métodos cuantitativos para evaluar la viabilidad celular:
- Prueba MTT: Método colorimétrico basado en la actividad de la deshidrogenasa mitocondrial; Se mide la formación de cristales de formazán en células vivas[Referencia:8]
- Prueba Ru (acapacidad neutra en rojo): Un procedimiento basado en la captación del colorante neutro en rojo en los lisosomas de las células vivas
- Prueba de UFC (unidades de formación de colonias): Evaluación de la capacidad de las células para formar colonias
- XTT, WST-1, LDH y otros métodos cuantitativos validados
Los resultados generalmente se dan como porcentaje de viabilidad celular y se comparan con el grupo de control. La norma define los criterios de aceptación y un sistema de clasificación para la clasificación de citotoxicidad (p. ej., una viabilidad inferior al 70% se considera citotóxica).
Los parámetros clave reportados en el estudio son:
- Usado modelo de contacto (extracto, indirecto, directo) y justificación
- Condiciones de preparación del extracto (según ISO 10993-12: medio, temperatura, duración, relación superficie-volumen)[Referencia:9]
- Usado línea celular y número de pasajes
- Densidad de siembra celular y condiciones culturales
- Aplicaciones Concentraciones de extracto (generalmente diluciones del 100%, 50%, 25%, etc.)
- Duración de la exposición (generalmente 24 horas)[Referencia:10]
- Usado Método de medición meditativo (MTT, NRU, CFU, etc.)
- Viabilidad de la celda del producto (para cada concentración) y el valor IC50
- Validez de controles positivos y negativos
- Clasificación de citotoxicidad (según una escala de 0-4 o similar)
- Datos sobre incertidumbre de medición y repetibilidad
¿Por qué se lleva a cabo?
EN ISO 10993-5 se realiza con los siguientes fines científicos y regulatorios:
- Primer examen de biocompatibilidad: Determinación rápida y fiable del potencial de los componentes materiales o extractos de un dispositivo médico para producir efectos tóxicos a nivel celular[Referencia:11]
- Conformidad MDR: Disposición de datos básicos de evaluación de la seguridad biológica bajo el Reglamento de Dispositivos Médicos de la UE (2017/745)
- Decisión sobre la transición a las pruebas in vivo: Uso del resultado de citotoxicidad para evaluar si se requieren pruebas de biocompatibilidad adicionales (sensibilización, irritación, implantación, toxicidad sistémica, etc.)
- Material y desarrollo: Detección temprana de materiales potencialmente citotóxicos y evaluación de alternativas dentro del proceso de desarrollo del producto
- Control del proceso de producción: Evaluación de los efectos de los pasos de producción tales como esterilización, recubrimiento y purificación en el perfil de citotoxicidad
- Protección animal (3R): Evitar los experimentos con animales innecesarios a través de la detección in vitro; Reducción de las necesidades de pruebas en animales
- Apoyo a los documentos de autorización: Uso como componente obligatorio del expediente de biocompatibilidad para las solicitudes de la FDA, de acuerdo con la UE-MDR y otras autoridades de concesión de licencias
- Aproximadamente prueba: Caracterización química (ISO 10993-18), genotoxicidad (ISO 10993-3), sensibilización (ISO 10993-10), irritación (ISO) 10993-23) y otros datos de biocompatibilidad que contribuyen a la evaluación holística del dispositivo médico
EN ISO 10993-5 no cubre en sí mismo todo el perfil de biocompatibilidad del producto; Los efectos tisulares locales, la toxicidad sistémica, la genotoxicidad y la hemocompatibilidad se evalúan utilizando normas separadas. Los resultados de la citotoxicidad in vitro pueden no reflejar completamente las condiciones in vivo; Los resultados deben interpretarse en relación con la caracterización química, otras pruebas biológicas y datos clínicos.
Como nanotest, realizamos evaluaciones de citotoxicidad in vitro de acuerdo con la norma EN ISO 10993-5 como parte de nuestra infraestructura de laboratorio acreditada y nuestro sistema de gestión de calidad con atención científica.
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