USP 85

USP <85>

USP <85>, United States Pharmacopeia (USP) – dies ist der allgemeine Abschnitt des von der „Bacterial Endotoxins Test“ veröffentlichten „Bakteriellen Endotoxintests“. Der Abschnitt beschreibt Testverfahren mit Limulus-Amöbozyten-Lysat (LAL) zur Bestimmung von Lipopolysacchariden (Endotoxinen), die aus der Zellwand gramnegativer Bakterien stammen.

Harmonisation et normes applicables : Harmonisé avec l'USP <85>, l'EP 2.6.14 (Pharmacopée européenne) et la JP 4.01 (Pharmacopée japonaise) (texte commun aux trois pharmacopées). Les principes de la méthode, les exigences de validation et les critères d'acceptation sont largement identiques. Parmi les références extérieures aux pharmacopées, on peut citer la norme ISO 10993-11 (Évaluation de la pyrogénicité liée aux matériaux dans les dispositifs médicaux) et l'USP <161> (kits de prélèvement sanguin/de contact avec des solvants) ; lorsqu’une détermination des endotoxines est requise pour les dispositifs médicaux, elle est réalisée conformément à ces normes.

Principe fondamental

Le LAL est un lysat extrait des amibocytes du crabe à queue en flèche (Limulus polyphemus ou Tachypleus tridentatus) qui, en présence d'endotoxines, déclenche une cascade de coagulation enzymatique. Cette cascade est mesurée, selon la méthode utilisée, sous forme de gélification, de variation de la turbidité ou d'apparition d'une coloration. La précision du test est garantie par la sensibilité indiquée du lysat (λ, UE/mL), l'étalonnage standard des endotoxines (CSE/RSE) et le contrôle d'interférence.

Méthodes

Die USP <85> definiert drei grundlegende Methodengruppen:

• Méthode Gel-Clot : test de seuil et méthode semi-quantitative ; évaluation visuelle de la gélification dans un mélange de lysat et d'endotoxines. Il s'agit de la méthode la plus répandue, considérée comme la méthode de référence.
• Méthode turbidimétrique : mesure photométrique de la variation de turbidité résultant de la coagulation ; mode cinétique ou mode à point final
• Méthode chromogénique : mesure photométrique du produit coloré résultant de la dégradation d'un substrat synthétique par la cascade de la coagulation ; mode cinétique ou mode à point final

Calculs et notions importants

• Seuil d'endotoxines (EL) : seuil défini dans la monographie (par exemple, formule K/M pour les produits parentéraux ; K = dose seuil pyrogène, M = dose horaire maximale par kg de poids corporel chez l'être humain)
• Dilution maximale valide (Maximum Valid Dilution, MVD) : MVD = (EL × concentration de l'échantillon) / λ
• λ (lambda) : sensibilité indiquée du lysat (UE/ml)
• CSE (Control Standard Endotoxin) : étalon de contrôle des endotoxines étalonné par rapport à l'étalon de référence USP pour les endotoxines (RSE)
• PPC (Positive Product Control) : confirmation de la détection d'une quantité connue d'endotoxines dans l'échantillon ; évaluation des interférences (inhibition/potentialisation)
• Test d'interférence (Test for Interfering Factors) : doit être réalisé pour chaque produit au cours de la phase de validation ; élimination de l'interférence par une dilution appropriée ou une adaptation de la méthode

Les paramètres fondamentaux présentés dans l'étude sont les suivants :

• Description du produit, valeur limite d'endotoxines (EL) et sa base de référence (monographie/formule)
• Méthode LAL utilisée (agrégat de gel, turbidimétrique, chromogène) et mode
• Lot de lysat, valeur λ et informations du fabricant
• Données d'étalonnage et de validation CSE/RSE
• MVD et dilutions utilisées
• Résultats du test d'interférence (récupération PPC, plage d'acceptabilité)
• Résultats des contrôles négatifs et positifs
• Résultat de l'analyse et comparaison avec l'EL
• Édition de l'USP-NF utilisée et révision du chapitre
• Incertitude de mesure et données de répétabilité

À quoi cela sert-il ?

USP <85> wird für die folgenden wissenschaftlichen und regulatorischen Zwecke angewendet:

• Sécurité des produits parentéraux : preuve que la contamination par les endotoxines dans les préparations injectables, les solutions pour perfusion, les collyres et autres produits pharmaceutiques se situe dans les limites autorisées
• Conformité à la pharmacopée : réalisation des essais prescrits pour les produits pour lesquels un test d'endotoxines est prévu dans les monographies USP-NF, ainsi que délivrance d'une déclaration de conformité pour la commercialisation sur le marché américain
• Évaluation des dispositifs médicaux : Évaluation de la pyrogénicité liée aux matériaux et des endotoxines dans les dispositifs entrant en contact avec le sang ou des solutions (par exemple, kits de perfusion, cathéters, implants) (conformément à la norme ISO 10993-11 et à l'USP <161&gt;)
• Contrôle des matières premières et des procédés : surveillance de la charge en endotoxines de l'eau (eau purifiée, eau pour préparations injectables), des matières premières et des composants d'emballage dans la fabrication pharmaceutique
• Stérilisation et validation des procédés : démonstration de l'efficacité des procédés de dépyrogénisation
• Contrôle qualité et validation : évaluation des lots de production au regard des endotoxines avant leur mise sur le marché
• Inspections et demandes auprès de la FDA : fourniture de données sur les endotoxines dans les dossiers 510(k), NDA/ANDA, IND et BLA ; démonstration de la conformité aux pharmacopées lors des inspections
• Bien-être animal (3R) : utilisation du test LAL comme alternative au test de détection des pyrogènes sur les lapins (USP <151&gt;)
• Approche relative à la force probante : contribution à l'évaluation globale de la sécurité du produit, en association avec les données relatives à la stérilité, à la biocompatibilité et à la pyrogénicité

La norme USP <85> détecte exclusivement les endotoxines bactériennes ; la pyrogénicité liée au matériau (pyrogènes non endotoxiques) et la contamination microbienne n'entrent pas dans le champ d'application de ce test et doivent être évaluées à l'aide des méthodes appropriées (USP <151> test de pyrogénicité sur le lapin, USP <71> test de stérilité, test d’activation des monocytes).

Als Nano-Test führen wir die bakteriellen Endotoxintests gemäß USP <85> im Rahmen unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems mit wissenschaftlicher Sorgfalt durch.

Für Informationen zur Methodenauswahl, Validierung und Erstprüfung, zur MVD-Berechnung, zu den Probenannahmebedingungen, zum Prüfplan und zu den Berichtsprozessen für Ihre bakteriellen Endotoxintests gemäß USP <85> können Sie sich gerne an Nano-Test wenden.