EP 2.6.1

EP 2.6.1, la Pharmacopée européenne (Ph. Eur.), section 2.6 (Essais biologiques), contient la méthode générale « Sterility », c'est-à-dire « Stérilité ». Cette section définit les méthodes de référence permettant de détecter la présence de micro-organismes vivants dans les produits pharmaceutiques qui doivent être commercialisés à l'état stérile.

Harmonisation et normes applicables : cette section est harmonisée avec la norme USP <71> (Essais de stérilité) et la norme JP 4.06 ; les principes des méthodes, les milieux de culture et les règles d'interprétation sont largement identiques. Le contrôle de stérilité des dispositifs médicaux est traité dans le cadre de la norme ISO 11737-2 ainsi que dans le contexte de la validation de la stérilisation ; la norme EP 2.6.1 sert notamment de base au contrôle de libération de routine des produits pharmaceutiques. Il convient de choisir le cadre approprié en fonction du type de produit et des exigences réglementaires.

Principe fondamental

Le contrôle de stérilité consiste à déterminer si une quantité donnée du produit contient des micro-organismes vivants. Le test E ne prouve pas que le produit est stérileE /strongE ; il évalue plutôt la probabilité d'une contamination sur la base d'un plan d'échantillonnage et d'une méthode spécifiques. Par conséquent, les résultats doivent être interprétés en tenant compte du contrôle du processus de production, des données relatives à la charge microbienne et de la validation de la stérilisation.

Méthodes

La norme EP 2.6.1 définit deux méthodes fondamentales :

Procédé de filtration sur membrane : le produit (ou sa solution) est filtré à travers une membrane dont la taille des pores est de 0,45 µm ; les micro-organismes sont retenus dans la membrane, qui est ensuite transférée dans un milieu de culture approprié, ou bien le milieu de culture est fait passer à travers la membrane. Il s'agit de la méthode privilégiée pour les produits liquides clairs, les produits hydrosolubles, les produits à structure creuse et les produits lavables. Dans le cas des produits contenant des antibiotiques, elle permet en outre d'éliminer les substances inhibitrices.
Méthode d'inoculation directe : le produit est introduit directement dans le milieu de culture, puis incubé. Cette méthode est utilisée pour les produits ne se prêtant pas à la filtration sur membrane (par exemple, les pommades, les crèmes, certaines suspensions).

Des directives supplémentaires s'appliquent à certains types de produits : produits huileux, pommades, crèmes, produits en aérosol et pour inhalation, dispositifs médicaux, systèmes transdermiques, gaz, etc. Pour ces produits, la préparation des échantillons (dissolution, émulsification, neutralisation, lavage) revêt une importance cruciale pour l'applicabilité de la méthode.

milieux de culture

Bouillon tryptique à base de soja (TSB) / Bouillon à base de digestat de soja et de caséine : pour les bactéries aérobies et les champignons ; incuber à 30–35 °C
Bouillon de Sabouraud au dextrose (SDB) / Milieu liquide de Sabouraud : pour les champignons et les levures ; incubation à 20-25 °C
Si nécessaire, on utilise des milieux de culture adaptés aux produits anaérobies (par exemple, le milieu au thioglycolate) et des conditions appropriées
L'efficacité des milieux de culture doit être confirmée par un test de stimulation de la croissance.

Incubation

Pour la méthode de filtration sur membrane : en règle générale, 14 jours ; TSB à 30-35 °C, SDB à 20-25 °C
Dans le cas de la méthode d'inoculation directe : en règle générale, 14 jours ; cette durée peut toutefois varier en fonction des caractéristiques du produit et des exigences de la monographie.
Pendant l'incubation, un contrôle visuel régulier est effectué ; la turbidité est considérée comme un indicateur de croissance.

Adéquation de la méthode (Method Suitability)

La validité du test de stérilité dépend de la démonstration de l'adéquation de la méthode. Le test de bactériostase/fungistase en constitue un élément essentiel :

Il doit être démontré que le produit n'inhibe pas la croissance d'un petit nombre (généralement ≤ 100 UFC) de micro-organismes sur le milieu de culture choisi.
Les micro-organismes généralement utilisés comme modèles d'essai sont : Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium sporogenes, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis
Si une inhibition est observée, il convient de remédier à ce phénomène par une neutralisation appropriée (par exemple, pénicillinase, bêta-lactamase), une dilution ou un rinçage.

Contrôles et évaluation

Contrôle négatif : surveillance de la stérilité du milieu de culture et de l'environnement d'essai
Contrôle positif : confirmation du bon fonctionnement du système de test (généralement en lien avec la validité de la méthode)
Interprétation : si aucune prolifération n'est observée à la fin de l'incubation, le produit a satisfait au test de stérilité ; en cas de prolifération, il a échoué et le micro-organisme en cause doit être identifié.
Le cas échéant, les dispositions de la pharmacopée relatives à la répétition du test (re-test) s'appliquent ; toutefois, la répétition du test ne remplace pas l'analyse des causes

Les paramètres fondamentaux présentés dans l'étude sont les suivants :

Description du produit, exigences de la monographie et plan d'échantillonnage
Méthode de contrôle de stérilité utilisée (filtration sur membrane ou inoculation directe)
Milieux de culture utilisés (TSB, SDB ou autres) et conditions d'incubation (température, durée)
Quantité d'échantillon et méthode de préparation des échantillons
Résultats de l'évaluation de la pertinence de la méthode / Essai de bactériostase et de fongistase
Micro-organismes d'essai utilisés et données de récupération
Contrôles négatifs et positifs et leurs résultats
Après l'incubation, évaluation visuelle et mise en évidence de la croissance bactérienne
Résultats de l'identification en cas de croissance bactérienne
Résultat du test : test de stérilité réussi / échoué
Édition de la Ph. Eur. utilisée et référence de la monographie
Données relatives à l'incertitude de mesure et à la répétabilité

Pourquoi cet examen est-il réalisé ?

La norme EP 2.6.1 est appliquée aux fins scientifiques et réglementaires suivantes :

Conformité à la pharmacopée : réalisation des essais de stérilité prescrits par la loi pour les produits, conformément aux monographies applicables, et aptitude à la mise sur le marché de l'Union européenne
Garantir la sécurité des patients : évaluation de la contamination par des micro-organismes vivants dans les préparations injectables, les préparations ophtalmiques, les solutions pour perfusion et les dispositifs médicaux administrés à l'état stérile
Libération du produit : évaluation de la stérilité des lots de production avant leur mise sur le marché
Intégration dans la validation de la stérilisation : démonstration de l'efficacité des procédés de stérilisation (en lien avec les normes ISO 11737-2, ISO 11135, ISO 11137, ISO 17665 et ISO 14937)
Contrôle des matières premières et des procédés : surveillance de l'état microbiologique des matières premières, des produits intermédiaires et des composants d'emballage
Contrôle et vérification de la qualité : preuve de la conformité à la pharmacopée et des normes d'hygiène de production lors des inspections officielles
Analyse des causes : contribution à l'identification de la source de contamination en cas d'échec du contrôle de stérilité
Approche fondée sur la force probante : contribution à la garantie globale de la stérilité du produit, en association avec les données relatives à la charge microbienne (ISO 11737-1), aux endotoxines (ISO 11737-3, EP 2.6.14), à la validation de la stérilisation et au conditionnement (ISO 11607)

La norme EP 2.6.1 ne prouve pas à elle seule la stérilité du produit ; la stérilité est une notion de probabilité et est évaluée conjointement avec le niveau de garantie de stérilité (SAL). Pour les produits pharmaceutiques, le contrôle de stérilité doit être réalisé conjointement avec le contrôle du processus de fabrication et la validation de la stérilisation.

Sous le nom de NanoTest, nous réalisons les essais de stérilité conformément à la norme EP 2.6.1, dans le cadre de notre infrastructure de laboratoire accréditée et de notre système de gestion de la qualité, en faisant preuve de rigueur scientifique.

Pour toute information concernant le choix des méthodes, leur adéquation, la préparation des échantillons, les conditions d'incubation, le calendrier des essais et les procédures de rapport pour vos essais de stérilité dans le cadre de la norme EP 2.6.1, n'hésitez pas à contacter NanoTest.

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