USP 85

USP <85>

USP <85>, United States Pharmacopeia (USP) – dies ist der allgemeine Abschnitt des von der „Bacterial Endotoxins Test“ veröffentlichten „Bakteriellen Endotoxintests“. Der Abschnitt beschreibt Testverfahren mit Limulus-Amöbozyten-Lysat (LAL) zur Bestimmung von Lipopolysacchariden (Endotoxinen), die aus der Zellwand gramnegativer Bakterien stammen.

Harmonisierung und relevante Normen: Harmonisiert mit USP <85>, EP 2.6.14 (Europäisches Arzneibuch) und JP 4.01 (Japanisches Arzneibuch) (gemeinsamer Text der drei Arzneibücher). Die Grundsätze der Methode, die Validierungsanforderungen und die Akzeptanzkriterien sind weitgehend identisch. Zu den Referenzen außerhalb der Pharmakopöen gehören ISO 10993-11 (Bewertung der materialbedingten Pyrogenität bei Medizinprodukten) und USP <161> (Blut-/Lösungsmittel-Kontakt-Sets); wenn eine Endotoxinnbestimmung bei Medizinprodukten erforderlich ist, wird diese in Verbindung mit diesen Normen durchgeführt.

Grundprinzip

LAL ist ein aus den Amöbozyten des Pfeilschwanzkrebses (Limulus polyphemus oder Tachypleus tridentatus) gewonnenes Lysat, das bei Vorhandensein von Endotoxinen eine enzymatische Gerinnungskaskade auslöst. Diese Kaskade wird je nach Methode in Form von Gelbildung, Trübungsänderung oder Farbbildung gemessen. Die Genauigkeit des Tests wird durch die angegebene Empfindlichkeit des Lysats (λ, EU/mL), die Standard-Endotoxin-Kalibrierung (CSE/RSE) und die Interferenzkontrolle gewährleistet.

Methoden

Die USP <85> definiert drei grundlegende Methodengruppen:

• Gel-Clot-Methode: Grenzwerttest und semiquantitative Methode; visuelle Beurteilung der Gelbildung in einer Lysat-Endotoxin-Mischung. Dies ist die am weitesten verbreitete und als Referenzmethode geltende Methode.
• Turbidimetrisches Verfahren: Photometrische Messung der Trübungsänderung infolge der Koagulation; kinetischer oder Endpunktmodus
• Chromogene Methode: Photometrische Messung des farbigen Produkts, das durch den Abbau eines synthetischen Substrats durch die Gerinnungskaskade entsteht; kinetischer oder Endpunktmodus

Wichtige Berechnungen und Begriffe

• Endotoxin-Grenzwert (EL): In der Monografie definierter Grenzwert (z. B. K/M-Formel für parenterale Produkte; K = pyrogene Schwellenwertdosis, M = maximale stündliche Dosis pro kg Körpergewicht beim Menschen)
• Maximale gültige Verdünnung (Maximum Valid Dilution, MVD): MVD = (EL × Probenkonzentration) / λ
• λ (Lambda): Angegebene Empfindlichkeit des Lysats (EU/ml)
• CSE (Control Standard Endotoxin): Gegen den USP Endotoxin Reference Standard (RSE) kalibrierter Kontrollstandard für Endotoxine
• PPC (Positive Product Control): Bestätigung der Wiederfindung einer bekannten Endotoxinmenge in der Probe; Bewertung von Interferenzen (Hemmung/Potenzierung)
• Interferenztest (Test for Interfering Factors): Muss für jedes Produkt in der Validierungsphase durchgeführt werden; Beseitigung der Interferenz durch geeignete Verdünnung oder Methodenanpassung

Die in der Studie berichteten grundlegenden Parameter sind folgende:

• Produktbeschreibung, Endotoxingrenzwert (EL) und dessen Grundlage (Monografie/Formel)
• Verwendete LAL-Methode (Gel-Aggregat, turbidimetrisch, chromogen) und Modus
• Lysat-Charge, λ-Wert und Herstellerangaben
• CSE/RSE-Kalibrierung und Validierungsdaten
• MVD und angewandte Verdünnungen
• Ergebnisse des Interferenztests (PPC-Wiederfindung, Akzeptanzbereich)
• Ergebnisse der Negativ- und Positivkontrolle
• Probenergebnis und Vergleich mit EL
• Verwendete USP-NF-Ausgabe und Kapitelrevision
• Messunsicherheit und Wiederholbarkeitsdaten

Wozu dient dies?

USP <85> wird für die folgenden wissenschaftlichen und regulatorischen Zwecke angewendet:

• Sicherheit parenteraler Produkte: Nachweis, dass die Endotoxinkontamination in Injektionspräparaten, Infusionslösungen, Augentropfen und anderen pharmazeutischen Produkten innerhalb der Grenzwerte liegt
• Konformität mit der Pharmakopöe: Durchführung der vorgeschriebenen Prüfung für Produkte, für die in den USP-NF-Monografien ein Endotoxintest vorgesehen ist, sowie Abgabe einer Konformitätserklärung für die Vermarktung auf dem US-Markt
• Bewertung von Medizinprodukten: Bewertung der materialbedingten Pyrogenität und Endotoxine bei Produkten, die mit Blut oder Lösungen in Kontakt kommen (z. B. Infusionssets, Katheter, Implantate) (in Übereinstimmung mit ISO 10993-11 und USP <161>)
• Rohstoff- und Prozesskontrolle: Überwachung der Endotoxinfracht von Wasser (gereinigtes Wasser, Wasser für Injektionszwecke), Rohstoffen und Verpackungskomponenten in der pharmazeutischen Herstellung
• Sterilisation und Prozessvalidierung: Nachweis der Wirksamkeit von Depyrogenisierungsprozessen
• Qualitätskontrolle und Freigabe: Bewertung der Produktionschargen hinsichtlich Endotoxinen vor der Markteinführung
• FDA-Inspektionen und -Anträge: Bereitstellung von Endotoxindaten in 510(k)-, NDA/ANDA-, IND- und BLA-Unterlagen; Nachweis der Konformität mit den Kompendien bei Inspektionen
• Tierschutz (3R): Einsatz des LAL-Tests als Alternative zum Pyrogen-Test an Kaninchen (USP <151>)
• Ansatz der Beweiskraft: Beitrag zur ganzheitlichen Sicherheitsbewertung des Produkts in Verbindung mit Daten zu Sterilität, Biokompatibilität und Pyrogenität

USP <85> erkennt ausschließlich bakterielle Endotoxine; materialbedingte Pyrogenität (nicht-endotoxische Pyrogene) und mikrobielle Kontamination fallen nicht in den Geltungsbereich dieses Tests und müssen mit den entsprechenden Methoden (USP <151> Kaninchen-Pyrogentest, USP <71> Sterilitätstest, Monozyten-Aktivierungstest) bewertet werden.

Als Nano-Test führen wir die bakteriellen Endotoxintests gemäß USP <85> im Rahmen unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems mit wissenschaftlicher Sorgfalt durch.

Für Informationen zur Methodenauswahl, Validierung und Erstprüfung, zur MVD-Berechnung, zu den Probenannahmebedingungen, zum Prüfplan und zu den Berichtsprozessen für Ihre bakteriellen Endotoxintests gemäß USP <85> können Sie sich gerne an Nano-Test wenden.