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EP 2.6.1

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EP 2.6.1

EP 2.6.1, Europäisches Arzneibuch (Ph. Eur.) Abschnitt 2.6 (Biologische Prüfungen) enthält die allgemeine Methode „Sterility“, d. h. „Sterilität“. Der Abschnitt definiert Referenzmethoden zum Nachweis lebender Mikroorganismen in pharmazeutischen Produkten, die steril angeboten werden müssen.

Harmonisierung und relevante Normen: Dieser Abschnitt ist mit USP <71> (Sterility Tests) und JP 4.06 harmonisiert; die Prinzipien der Methoden, die Nährmedien und die Auswertungsregeln sind weitgehend identisch. Die Sterilitätsprüfung bei Medizinprodukten wird im Rahmen von ISO 11737-2 sowie im Zusammenhang mit der Sterilisationsvalidierung behandelt; EP 2.6.1 dient insbesondere als Grundlage für die routinemäßige Freigabeprüfung von pharmazeutischen Produkten. Je nach Produkttyp und regulatorischen Anforderungen ist der geeignete Rahmen auszuwählen.

Grundprinzip

Die Sterilitätsprüfung basiert auf der Feststellung, ob in einer bestimmten Menge des Produkts lebende Mikroorganismen vorhanden sind. Die Prüfung E beweist nicht, dass das Produkt steril istE /strongE ; sie bewertet vielmehr die Wahrscheinlichkeit einer Kontamination anhand eines bestimmten Probenahmeplans und einer bestimmten Methode. Daher sollten die Ergebnisse im Zusammenhang mit der Kontrolle des Produktionsprozesses, den Bioburden-Daten und der Sterilisationsvalidierung interpretiert werden.

Methoden

EP 2.6.1 definiert zwei grundlegende Methoden:

  • Membranfiltrationsverfahren: Das Produkt (oder dessen Lösung) wird durch eine Membran mit einer Porengröße von 0,45 µm filtriert; Mikroorganismen werden in der Membran zurückgehalten, und die Membran wird in ein geeignetes Nährmedium überführt oder das Nährmedium wird durch die Membran geleitet. Dies ist die bevorzugte Methode für klare flüssige Produkte, wasserlösliche Produkte, Hohlkörper und abwaschbare Produkte. Bei antibiotikahaltigen Produkten ermöglicht sie zudem die Entfernung von Hemmstoffen.
  • Direkte Inokulationsmethode: Das Produkt wird direkt in das Nährmedium überführt und inkubiert. Wird bei Produkten angewendet, bei denen die Membranfiltration nicht möglich ist (z. B. Salben, Cremes, bestimmte Suspensionen).

Für bestimmte Produkttypen gibt es zusätzliche Richtlinien: ölige Produkte, Salben, Cremes, Aerosol- und Inhalationsprodukte, Medizinprodukte, transdermale Systeme, Gase usw. Bei diesen Produkten ist die Probenvorbereitung (Auflösen, Emulgieren, Neutralisieren, Waschen) für die Anwendbarkeit der Methode von entscheidender Bedeutung.

Nährmedien

  • Tryptic Soy Broth (TSB) / Soybean-Casein Digest Broth: Für aerobe Bakterien und Pilze; bei 30–35 °C inkubieren
  • Sabouraud-Dextrose-Bouillon (SDB) / Sabouraud-Flüssigmedium: Für Pilze und Hefen; wird bei 20–25 °C inkubiert
  • Bei Bedarf werden für anaerobe Produkte geeignete Nährmedien (z. B. Thioglycolat-Medium) und Bedingungen verwendet
  • Die Leistungsfähigkeit der Nährmedien muss durch einen Wachstumsförderungs-Test bestätigt werden

Inkubation

  • Bei der Membranfiltrationsmethode: in der Regel 14 Tage; TSB bei 30–35 °C, SDB bei 20–25 °C
  • Bei der Direktinokulationsmethode: in der Regel 14 Tage; dies kann jedoch je nach Produkteigenschaften und Anforderungen der Monografie variieren
  • Während der Inkubation wird eine regelmäßige Sichtprüfung durchgeführt; Trübung wird als Indikator für Wachstum gewertet

Methodeneignung (Method Suitability)

Die Gültigkeit des Sterilitätstests hängt vom Nachweis der Methodeneignung ab. Ein wesentlicher Bestandteil ist der Bakteriostase-/Fungistase-Test:

  • Es muss nachgewiesen werden, dass das Produkt das Wachstum einer geringen Anzahl (in der Regel ≤100 KBE) von Mikroorganismen auf dem ausgewählten Nährmedium nicht hemmt
  • Als Testmikroorganismen dienen typischerweise: Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium sporogenes, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis
  • Wird eine Hemmung beobachtet, ist das Verfahren durch geeignete Neutralisierung (z. B. Penicillinase, Beta-Laktamase), Verdünnung oder Spülung zu beheben

Kontrollen und Auswertung

  • Negativkontrolle: Überwachung der Sterilität des Nährmediums und der Testumgebung
  • Positivkontrolle: Bestätigung der Funktionsfähigkeit des Testsystems (in der Regel in Verbindung mit der Eignung der Methode)
  • Auswertung: Liegt am Ende der Inkubation kein Wachstum vor, hat das Produkt die Sterilitätsprüfung bestanden; liegt Wachstum vor, hat es nicht bestanden und der gewachsene Mikroorganismus muss identifiziert werden
  • Gegebenenfalls gelten die Vorschriften der Pharmakopöe für eine Wiederholung des Tests (Re-Test); die Wiederholung des Tests ersetzt jedoch nicht die Ursachenanalyse

Die in der Studie berichteten grundlegenden Parameter sind folgende:

  • Produktbeschreibung, Anforderungen der Monografie und Probenahmeplan
  • Verwendete Sterilitätsprüfmethode (Membranfiltration oder direkte Inokulation)
  • Verwendete Nährmedien (TSB, SDB oder andere) und Inkubationsbedingungen (Temperatur, Dauer)
  • Probenmenge und Probenvorbereitungsmethode
  • Ergebnisse der Methodeneignung / Bakteriostase-Fungistase-Prüfung
  • Verwendete Testmikroorganismen und Wiederfindungsdaten
  • Negativ- und Positivkontrollen und deren Ergebnisse
  • Nach der Inkubation visuelle Beurteilung und Nachweis von Keimwachstum
  • Bei Keimwachstum Identifizierung Ergebnisse
  • Testergebnis: Sterilitätstest bestanden / nicht bestanden
  • Verwendete Ausgabe der Ph. Eur. und Monographie-Referenz
  • Daten zur Messunsicherheit und Wiederholbarkeit

Warum wird er durchgeführt?

EP 2.6.1 wird für die folgenden wissenschaftlichen und regulatorischen Zwecke angewendet:

  • Arzneibuchkonformität: Durchführung der gesetzlich vorgeschriebenen Sterilitätsprüfung für Produkte gemäß den entsprechenden Monografien und Eignung für das Inverkehrbringen auf dem EU-Markt
  • Gewährleistung der Patientensicherheit: Bewertung der Kontamination mit lebenden Mikroorganismen bei steril verabreichten Injektionspräparaten, Augenpräparaten, Infusionslösungen und Medizinprodukten
  • Produktfreigabe: Bewertung der Sterilität von Produktionschargen vor dem Inverkehrbringen
  • Integration in die Sterilisationsvalidierung: Nachweis der Wirksamkeit von Sterilisationsprozessen (in Verbindung mit ISO 11737-2, ISO 11135, ISO 11137, ISO 17665, ISO 14937)
  • Rohstoff- und Prozesskontrolle: Überwachung des mikrobiologischen Zustands von Rohstoffen, Zwischenprodukten und Verpackungskomponenten
  • Qualitätskontrolle und -prüfung: Nachweis der Pharmakopöe-Konformität und der Produktionshygiene bei behördlichen Inspektionen
  • Ursachenanalyse: Beitrag zur Ermittlung der Kontaminationsquelle im Falle eines Sterilitätsversagens
  • Ansatz der Beweiskraft: Beitrag zur ganzheitlichen Sterilitätssicherung des Produkts in Verbindung mit Daten zu Bioburden (ISO 11737-1), Endotoxinen (ISO 11737-3, EP 2.6.14), Sterilisationsvalidierung und Verpackung (ISO 11607)

EP 2.6.1 beweist für sich genommen nicht die Sterilität des Produkts; Sterilität ist ein Ausdruck der Wahrscheinlichkeit und wird zusammen mit dem Sterilitätssicherheitsniveau (SAL) bewertet. Bei pharmazeutischen Produkten sollte die Sterilitätsprüfung zusammen mit der Kontrolle des Herstellungsprozesses und der Sterilisationsvalidierung durchgeführt werden.

Als NanoTest führen wir die Sterilitätsprüfungen gemäß EP 2.6.1 im Rahmen unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems mit wissenschaftlicher Sorgfalt durch.

Für Informationen zur Methodenauswahl, zur Methodeneignung, zur Probenvorbereitung, zu den Inkubationsbedingungen, zum Testzeitplan und zu den Berichtsprozessen für Ihre Sterilitätstests im Rahmen von EP 2.6.1 können Sie sich gerne an NanoTest wenden.

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