La TG 443 de l’OCDE correspond à la norme « Extended One-Generation Reproductive Toxicity Study » (EOGRTS), c’est-à-dire l’étude étendue de toxicité pour la reproduction sur une génération, qui figure à la section 4 (effets sur la santé) des Lignes directrices de l’OCDE pour les essais sur les produits chimiques (OECD Test Guidelines for the Testing of Chemicals). Adopté en 2011 et mis à jour en 2018, ce guide est conçu comme une norme d’essai destinée à remplacer les études sur deux générations existantes (TG 415 et TG 416) et offre une structure de cohortes plus souple ainsi qu’un catalogue de paramètres d’évaluation plus complet.
Le principe de base du test consiste à administrer la substance d'essai à la génération parentale (P) dès avant l'accouplement, à accoupler ces animaux, puis à exposer la génération F1 à la substance in utero et par le lait maternel. Si nécessaire, les descendants de la génération F1 peuvent également être soumis à une administration directe après le sevrage. L'étude est généralement réalisée sur des rats.
La principale nouveauté de l'EOGRTS réside dans sa conception par cohortes. Les cohortes sont activées ou désactivées en fonction de déclencheurs conditionnels :
Cohorte 1A (cohorte de reproduction et de développement) :
- Paramètres relatifs à l'accouplement, à la fertilité et à la conception
- Cycle œstral, paramètres spermatiques
- Données relatives à la gestation, à la mise bas et à l'allaitement
- Développement postnatal chez la descendance F1 (poids corporel, viabilité)
- Distance anogénitale (AGD) et nombre de trayons
- Développement pubertaire (ouverture vaginale, fente préputiale)
- Taux d'hormones thyroïdiennes (T4, TSH)
- Poids et histopathologie des organes reproducteurs et des organes associés
Cohorte 1B (cohorte de reproduction facultative) :
- Cohorte supplémentaire sans examen histopathologique approfondi, axée sur les fonctions reproductives
- Utilisé pour renforcer la fiabilité des données dans certains contextes réglementaires
Cohorte 2A (neurotoxicité développementale – DNT) :
- Activité motrice, réflexe de sursaut acoustique (réflexe de sursaut auditif)
- Tests d'apprentissage et de mémoire (par exemple, le labyrinthe aquatique de Morris)
- Poids du cerveau et examen neuropathologique
- N'est activée qu'en cas d'alerte structurelle (structural alert) ou lorsqu'elle est déclenchée par des données antérieures
Cohorte 2B (cohorte DNT facultative) :
- Évaluation comportementale sans neuropathologie
Cohorte 3 (immunotoxicité liée au développement – DIT) :
- Réponse anticorps dépendante des lymphocytes T (TDAR)
- phénotypage immunologique
- Activité des cellules NK
- N'est activé que s'il existe des indices d'immunotoxicité
Cette structure de cohortes vise à réduire considérablement le nombre d'animaux utilisés par rapport aux études sur deux générations (la littérature fait état d'une réduction pouvant atteindre environ 40 %) tout en élargissant la portée scientifique. La constitution des cohortes est justifiée par les propriétés structurelles de la substance d'essai, les données antérieures sur la toxicité et les exigences réglementaires.
Le protocole de l'étude comprend un groupe témoin négatif, un groupe témoin « solvant » et, le cas échéant, un groupe témoin positif.
Pourquoi est-elle réalisée ?
Le projet TG 443 de l'OCDE est mené à des fins scientifiques et réglementaires, notamment :
- Caractérisation complète de la toxicité pour la reproduction et le développement : évaluation globale de la fertilité, de la gestation, de la lactation et du développement de la génération F1 dans le cadre d'une seule étude
- Étude des effets endocriniens : évaluation de l'activité endocrinienne à l'aide de paramètres sensibles tels que l'AGD, le nombre de mamelons, le moment de la puberté et les taux d'hormones thyroïdiennes
- Évaluation de la neurotoxicité liée au développement (DNT) : évaluation des effets sur le développement neurologique à l'aide de critères d'évaluation comportementaux et neuropathologiques
- Évaluation de l'immunotoxicité liée au développement (DIT) : étude du développement du système immunitaire à l'aide du TDAR et de l'immunophénotypage
- Assistance pour les dossiers d'autorisation : utilisation dans le cadre des évaluations REACH, des produits phytopharmaceutiques, des biocides et de la sécurité des médicaments
- Réduction du recours à l'expérimentation animale (les 3R) : obtention de données plus complètes avec moins d'animaux par rapport aux études sur deux générations
- Approche fondée sur le « poids de la preuve » : contribution à l'évaluation des risques en combinaison avec d'autres données de toxicité, des propriétés physico-chimiques et une évaluation de l'exposition
Dans le cadre des nano-tests, nous menons des études conformément à la ligne directrice TG 443 de l'OCDE, avec toute la rigueur scientifique requise, en nous appuyant sur notre infrastructure de laboratoire accréditée et notre système de gestion de la qualité. Notre gamme de prestations comprend les éléments suivants :
Conception de l'étude et élaboration du protocole
Élaboration d'un protocole d'essai et d'un plan d'étude de cohorte conformément à la ligne directrice n° 443 de l'OCDE
Définition de la plage de dosage et du protocole d'essai principal en fonction des propriétés physico-chimiques de la substance testée et des exigences réglementaires
Justification scientifique des critères de déclenchement pour la cohorte 2A (DNT) et la cohorte 3 (DIT)
Définition du témoin négatif, du témoin « solvant » et, le cas échéant, des groupes témoins positifs appropriés ; justification scientifique du choix de l'espèce animale, de la voie d'administration, des posologies et de la durée d'administration ; respect des exigences en matière d'autorisations éthiques et de bien-être animal