OECD TG 475 ist der Standard „Mammalian Bone Marrow Chromosomal Aberration Test“, d. h. der Chromosomenaberrationstest an Säugetier-Knochenmark, der in Abschnitt 4 (Gesundheitseffekte) der OECD-Prüfrichtlinien für die Prüfung von Chemikalien enthalten ist. Der Test dient der Bewertung des Potenzials einer Testsubstanz, unter in-vivo-Bedingungen strukturelle Chromosomenaberrationen in Knochenmarkszellen zu verursachen.
Das Grundprinzip des Tests besteht in der mikroskopischen Untersuchung von Veränderungen der Chromosomenstruktur in Metaphasen-Zellen, die nach der Verabreichung aus dem Knochenmark gewonnen werden. Die Bewertung erfolgt in der Regel am Knochenmark von Mäusen oder Ratten. Die Testsubstanz wird über einen geeigneten Verabreichungsweg verabreicht; zur Erzielung eines Metaphasenstillstands wird innerhalb eines geeigneten Zeitraums Colcemid oder ein ähnliches Mittel verabreicht. Die Knochenmarkzellen werden entnommen, und nach hypotonischer Behandlung, Fixierung, Ausstreichung und Färbung werden Metaphasenpräparate angefertigt.
Die wichtigsten untersuchten strukturellen Aberrationen sind:
Chromatiden-Aberrationen: Chromatidenbrüche, Chromatidenaustausch
Chromosomen-Aberrationen: Chromosomenbrüche, Fragmente, Ringchromosomen, diszentrische Chromosomen, Austausch
- Bei Bedarf können auch numerische Veränderungen wie Polypoidie erfasst werden; der primäre Zweck des Tests ist jedoch der Nachweis struktureller Chromosomenaberrationen.
Bei der Auswertung werden in der Regel mindestens 100 gut ausgebreitete Metaphasen pro Tier untersucht. Zudem können Indikatoren wie der Mitoseindex zur Beurteilung der zytotoxischen Wirkung auf das Knochenmark herangezogen werden. Das Versuchsdesign umfasst eine Negativkontrolle, eine Lösungsmittelkontrolle und geeignete Positivkontrollgruppen; die Gruppengröße und die Dosisfestlegung werden gemäß OECD TG 475 und den einschlägigen regulatorischen Anforderungen begründet.
Warum wird der Test durchgeführt?
OECD TG 475 wird zu folgenden wissenschaftlichen und regulatorischen Zwecken durchgeführt:
Identifizierung eines genotoxischen Risikos: Bestimmung des Potenzials der Prüfsubstanz, strukturelle Chromosomenaberrationen im Knochenmark zu verursachen
Nachweis einer klastogenen Wirkung: Bewertung des klastogenen Potenzials anhand von Chromosomenbrüchen und strukturellen Veränderungen
Validierung von In-vitro-Ergebnissen: In-vivo-Nachverfolgung von Substanzen, die in In-vitro-Genotoxizitätstests positiv oder verdächtig befunden wurden
Unterstützung von Zulassungsunterlagen: Verwendung bei der Sicherheitsbewertung von Chemikalien, Arzneimitteln, Pestiziden, Biozidprodukten, Medizinprodukten und biotechnologischen Produkten
Ansatz der Beweiskraft: Beitrag zur Risikobewertung in Verbindung mit anderen Genotoxizitätstests, physikalisch-chemischen Daten und der Expositionsbewertung
- Produktsicherheit und Qualitätssicherung: Dokumentation des biologischen Sicherheitsprofils von Rohstoffen, Zwischenprodukten oder Endprodukten
OECD TG 475 ist kein eigenständiger Karzinogenitätstest. Er dient der Identifizierung eines genotoxischen Risikos; die Ergebnisse sollten zusammen mit anderen in-vivo- und in-vitro-Genotoxizitätsdaten interpretiert werden.
Als Nano-Test führen wir die Untersuchungen im Rahmen der OECD TG 475 mit wissenschaftlicher Sorgfalt auf der Grundlage unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems durch. Unser Leistungsumfang umfasst Folgendes:
Studienkonzeption und Protokollerstellung
- Erstellung eines Studienprotokolls gemäß OECD TG 475
Ermittlung des Dosierungsbereichs und Festlegung des Hauptversuchsaufbaus entsprechend den physikalisch-chemischen Eigenschaften der Testsubstanz
Festlegung der Negativkontrolle, der Lösungsmittelkontrolle und geeigneter PositivkontrollgruppenWissenschaftliche Begründung der Verabreichungsart, der Dosierungsstufen, der Verabreichungsdauer und der ProbenentnahmezeitpunkteEinhaltung der ethischen Genehmigungs- und Tierschutzanforderungen
OECD TG 475 bewertet strukturelle Chromosomenaberrationen in sich schnell teilenden Geweben wie dem Knochenmark. Es spiegelt möglicherweise nicht allein gewebespezifische oder nur in bestimmten Zelltypen auftretende Effekte wider. Die Sensitivität hinsichtlich numerischer Chromosomenveränderungen kann begrenzt sein; zur Bewertung des anogenetischen Potenzials können zusätzliche Tests wie der Mikronukleustest erforderlich sein. Bei der Interpretation der Ergebnisse sind die Pharmakokinetik der Prüfsubstanz, ihre metabolische Aktivierung, Speziesunterschiede sowie gleichzeitig durchgeführte andere Genotoxizitätstests zu berücksichtigen. Der Test sollte in regulatorischen Entscheidungsprozessen nicht isoliert, sondern im Rahmen eines „Weight-of-Evidence“-Ansatzes bewertet werden.
Für Informationen zum Versuchsdesign, zu den Probenannahmebedingungen und zu den Berichtsprozessen im Rahmen Ihrer Studien gemäß OECD TG 475 können Sie sich an Nano-Test wenden.