ISO 21149 ist eine von der Internationalen Organisation für Normung (ISO) veröffentlichte Norm für ein mikrobiologisches Analyseverfahren zur Zählung und zum Nachweis aerober mesophiler Bakterien in Kosmetikprodukten. Der vollständige Titel der Norm lautet „Cosmetics – Microbiology – Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria“, d. h. „Kosmetische Mittel – Mikrobiologie – Zählung und Nachweis aerober mesophiler Bakterien“.
ISO 21149 wird zusammen mit ISO 17516 (Kosmetik – Mikrobiologie – Mikrobiologische Grenzwerte) angewendet. Während ISO 17516 die zulässigen mikrobiologischen Grenzwerte für Kosmetikprodukte definiert, liefert ISO 21149 die Zähl- und Nachweisverfahren, die zur Bewertung dieser Grenzwerte erforderlich sind. Das Verfahren wird insbesondere bei wasserfreien, Produkten mit geringer Wasseraktivität und mikrobiologisch risikoarmen Produkten häufig angewendet; bei Produkten mit hohem Wassergehalt hingegen wird sie in Verbindung mit spezifischen Standards zum Nachweis von Krankheitserregern wie ISO 21150 (Candida albicans), ISO 22717 (Pseudomonas aeruginosa) und ISO 22718 (Staphylococcus aureus) angewendet.
Das Grundprinzip der Norm besteht aus zwei Schritten:
1. Zählung (Enumeration)
- Die Probe wird in einem geeigneten Verdünnungsmittel (z. B. Tween-80-Lösung, Peptonwasser usw.) homogenisiert.
- Die Probe wird auf ein geeignetes festes Nährmedium (z. B. Tryptic Soy Agar – TSA oder Plate Count Agar – PCA) ausgestrichen; das Ausstreichen kann mittels der Gießplatte (Pour Plate) oder der Streuplatte (Spread Plate) erfolgen.
- Die Petrischalen werden unter aeroben Bedingungen bei 30 °C ± 2 °C 3–5 Tage lang inkubiert.
- Am Ende der Inkubation werden die entstandenen Kolonien gezählt und das Ergebnis als koloniebildende Einheiten (KBE/g oder KBE/ml) angegeben.
2. Nachweis (Detection)
- Die Probe wird in einem geeigneten flüssigen Nährmedium (Anreicherungsbrühe) inkubiert.
- Nach der Anreicherung wird das Vorhandensein von Keimen durch Trübung, Passagierung auf festes Nährmedium oder biochemische/molekulare Bestätigung bewertet.
- Der Nachweis ist insbesondere bei Produkten mit geringer Bakterienzahl wichtig, bei denen die Zählmethode unzureichend ist.
Die Validierung des Verfahrens erfolgt im Rahmen von ISO 18415 und ISO 21148 (Kosmetika – Mikrobiologie – Allgemeine Anweisungen). Alle Kolonien, die auf nicht-selektiven Nährböden wachsen, werden als aerobe mesophile Bakterien bewertet; bei Bedarf kann jedoch eine Bestätigung mittels Gram-Färbung, Katalase-/Oxidase-Tests oder molekularer Methoden (16S-rRNA-Sequenzierung, qPCR) erfolgen.
Die in der Studie berichteten grundlegenden Parameter sind folgende:
- KOB/g oder KOB/mL als Gesamtzahl der aeroben mesophilen Bakterien
- Verwendetes Verdünnungsmittel, Nährmedium und Ausstreumethode (Gießen/Ausstreichen)
- Inkubationstemperatur und Inkubationsdauer
- Zahl der Kolonien (Parallelplatten)
- Befund (vorhanden/nicht vorhanden) und gegebenenfalls Bestätigungsverfahren
- Vergleich mit dem mikrobiologischen Grenzwert des Produkts
- Bedingungen der Probenvorbereitung (Homogenisierung, Neutralisierung)
- Angaben zur Methodenvalidierung (gemäß ISO 18415/21148)
- Daten zur Messunsicherheit und Wiederholbarkeit
Wozu dient die Prüfung?
Die Prüfung nach ISO 21149 wird zu folgenden wissenschaftlichen, technischen und regulatorischen Zwecken durchgeführt:
- Bewertung der Produktsicherheit: Bestimmung des Ausmaßes der mikrobiologischen Kontamination in Kosmetikprodukten und Gewährleistung der Verbrauchersicherheit
- Überprüfung der Einhaltung der Grenzwerte gemäß ISO 17516: Bewertung, ob das Produkt innerhalb der zulässigen mikrobiologischen Grenzwerte liegt
- Qualitätskontrolle: Überwachung der mikrobiologischen Konsistenz zwischen den Produktionschargen
- Rohstoffkontrolle: Bewertung der mikrobiologischen Qualität der in Kosmetikprodukten verwendeten Rohstoffe
- Unterstützung der Wirksamkeit des Konservierungssystems: Bereitstellung von Basisdaten für die Bewertung der Wirksamkeit von Konservierungsstoffen (Challenge-Test – ISO 11930)
- Stabilitäts- und Haltbarkeitsbewertung: Überwachung, ob die mikrobiologische Qualität während der gesamten Lagerzeit erhalten bleibt
- Unterstützung bei der Erstellung von Zulassungsunterlagen: Bereitstellung von Daten für den Kosmetik-Sicherheitsbericht (CPSR) im Rahmen der EU-Kosmetikverordnung (EG 1223/2009) und der entsprechenden nationalen Vorschriften
- GMP-Konformität: Nachweis der Produktionshygiene gemäß ISO 22716 (Kosmetik-GMP)
- Ansatz der Beweiskraft: Beitrag zur ganzheitlichen Bewertung des Produkts in Verbindung mit anderen mikrobiologischen Tests, Tests zur Wirksamkeit von Konservierungsstoffen und Stabilitätsdaten
Die ISO 21149 allein garantiert nicht die vollständige Produktsicherheit. Der Nachweis spezifischer Krankheitserreger (Candida albicans – ISO 21150, Pseudomonas aeruginosa – ISO 22717, Staphylococcus aureus – ISO 22718) und die Prüfung der konservierenden Wirksamkeit (ISO 11930) müssen anhand separater Normen bewertet werden. Die Ergebnisse müssen im Zusammenhang mit der Produktformulierung, den Produktionsbedingungen sowie den Verpackungs- und Lagerbedingungen interpretiert werden.
Als Nano-Test führen wir mikrobiologische Zähl- und Nachweisdienstleistungen im Rahmen der ISO 21149 mit wissenschaftlicher Sorgfalt auf der Grundlage unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems durch. Unser Leistungsumfang umfasst Folgendes:
Methodenauswahl und -validierung
- Auswahl des geeigneten Verdünnungsmittels und Nährmediums entsprechend dem Produkttyp (Emulsion, Gel, Pulver, wässrige/alkoholische Lösung usw.) und den physikalisch-chemischen Eigenschaften
- Festlegung der Probenvorbereitungsstrategie (Homogenisierung, Neutralisierung, Filtration)
- Methodenvalidierung (gemäß ISO 18415/21148): Linearität, Richtigkeit, Wiederholbarkeit und Zwischenwiederholbarkeit
- Gegebenenfalls Verifizierung der auf nicht-selektiven Nährmedien gewachsenen Kolonien (Gram-Färbung, biochemische Tests, molekulare Methoden)
- Bewertung und Berichterstattung der Messunsicherheit
Für Informationen zur Methoden- und Nährmedienauswahl, zu den Probenannahmebedingungen, zum Vergleich mit den Grenzwerten nach ISO 17516, zum Testzeitplan und zu den Berichtsprozessen im Rahmen Ihrer mikrobiologischen Zähl- und Nachweisuntersuchungen gemäß ISO 21149 können Sie sich gerne an Nano-Test wenden.