Contrôle de stérilité selon les bonnes pratiques de laboratoire (BPL) pour les produits pharmaceutiques : méthodes, validation et solutions Nano-Test
Le contrôle de stérilité est une analyse microbiologique essentielle qui permet de déterminer si des micro-organismes vivants sont présents dans des produits pharmaceutiques déclarés stériles. Pour les préparations injectables, les collyres, les solutions pour perfusion, les produits biologiques et les dispositifs médicaux stériles, ce test constitue la dernière barrière de sécurité pour la sécurité des patients. La présence de micro-organismes vivants dans un produit peut entraîner des conséquences cliniques graves, voire mortelles, telles qu’une septicémie.
Les essais de stérilité réalisés dans le cadre des bonnes pratiques de laboratoire (BPL) garantissent que les résultats sont fiables, reproductibles et acceptables pour les autorités réglementaires. Dans cet article, nous aborderons les méthodes fondamentales des essais de stérilité pharmaceutiques conformes aux BPL, les exigences de validation ainsi que les services accrédités proposés par Nano-Test dans ce domaine.
Qu'est-ce qu'un test de stérilité et pourquoi doit-il être réalisé dans le cadre des BPL ?
Un test de stérilité est réalisé afin de vérifier l'efficacité du processus de stérilisation du produit et de démontrer que le produit fini ne contient aucun micro-organisme vivant. Toutefois, un test de stérilité ne garantit pas à lui seul qu'un lot est stérile ; cette garantie est assurée en premier lieu par la validation du processus de stérilisation ou du processus de fabrication aseptique. Les pharmacopées le soulignent expressément : le test ne remplace pas la validation du processus, mais vient la compléter [référence : 0].
La réalisation de tests de stérilité dans le cadre des BPL est absolument indispensable pour les raisons suivantes :
- Fiabilité des données : les BPL définissent des règles strictes en matière de formation du personnel, d'étalonnage des appareils, de procédures opérationnelles standard (SOP) et d'intégrité des données (principes ALCOA+).
- Reconnaissance officielle : des autorités telles que la FDA, l'EMA et la TİTCK exigent, dans le cadre des demandes d'autorisation de mise sur le marché, des rapports d'essais de stérilité conformes aux BPL.
- Documentation des conditions d'asepsie : il convient de démontrer que le test a été réalisé dans des conditions d'asepsie et que les contrôles de l'environnement ont été effectués régulièrement[référence : 2].
Méthodes de contrôle de la stérilité
Arzneibücher (Ph. Eur. 2.6.1, USP <71>, JP) definieren zwei grundlegende Methoden für die Sterilitätsprüfung: Membranfiltration und direkte Inokulation. Die Wahl der Methode hängt von der Art des Produkts und seinen physikalisch-chemischen Eigenschaften ab.
1. Procédé de filtration sur membrane
Si les caractéristiques du produit permettent une filtration, la méthode de filtration sur membrane est privilégiée [référence : 3]. Dans ce procédé, le produit est fait passer à travers un filtre à membrane dont la taille des pores ne dépasse pas 0,45 µm ; les micro-organismes sont retenus sur le filtre, qui est ensuite transféré dans un milieu de culture approprié et incubé.
Domaines d'application : solutions aqueuses, préparations à base d'alcool ou d'huile, produits miscibles avec des solvants aqueux ou huileux.
En cas d'activité antimicrobienne : si le produit présente des propriétés antimicrobiennes, la membrane doit être lavée au moins trois fois ; le cycle de lavage ne doit pas dépasser cinq cycles de lavage de 100 ml chacun par filtre.
2. Procédé d'inoculation directe
Dans les cas où la filtration sur membrane n'est pas adaptée (par exemple pour les produits non filtrables, visqueux ou contenant des particules), on recourt à la méthode d'inoculation directe. Dans ce procédé, le produit est transféré directement dans le milieu de culture[référence:7]. Il convient aux produits ne présentant pas d'activité antimicrobienne ou dont cette activité peut être éliminée par dilution ou inactivation.
3. Milieux de culture utilisés
Le test de stérilité fait appel à deux milieux de culture de base[référence : 9] :
- Milieu fluide au thioglycolate (FTM) : il est principalement conçu pour les bactéries anaérobies, mais permet également de détecter les bactéries aérobies.
- Milieu à base de digestat de soja et de caséine (SCDM) : il convient aussi bien à la culture des champignons qu'à celle des bactéries aérobies.
Conditions d'incubation : pour le FTM, 3 jours à 32,5 ± 2,5 °C (test de validation) ou 14 jours (test de routine) ; pour le SCDM, 5 jours à 22,5 ± 2,5 °C (validation) ou 14 jours (routine).
Comparaison des méthodes de contrôle de la stérilité
Le tableau suivant résume les deux méthodes fondamentales de contrôle de stérilité :
| Procédure | principe | Types de produits adaptés | Utilisation dans les produits antimicrobiens | Avantages |
|---|---|---|---|---|
| filtration sur membrane | Le produit est acheminé à travers un filtre de 0,45 µm ; les micro-organismes sont retenus par le filtre et transférés dans le milieu de culture. | Solutions aqueuses, alcooliques et huileuses ; produits filtrables. | La membrane est rincée au moins trois fois (max. 5 × 100 ml). | Méthode privilégiée ; large champ d'application. |
| Inoculation directe | Le produit est introduit directement dans le milieu de culture. | Produits non filtrables, visqueux et contenant des particules. | L'effet antimicrobien est neutralisé par dilution ou inactivation. | Alternative dans les cas où la filtration sur membrane n'est pas adaptée. |
Validation de l'adéquation de la méthode : la pierre angulaire du test de stérilité
Un test de stérilité n'est valable que si non seulement la méthode appropriée est choisie, mais aussi s'il est démontré que cette méthode est adaptée à la matrice du produit. Cette validation , appelée « test d'adéquation de la méthode » (method suitability test), confirme que l'activité antimicrobienne du produit est suffisamment inhibée dans les conditions d'essai.
La validation doit être effectuée dans les cas suivants :
- Lorsqu'un nouveau produit est soumis à un test de stérilité,
- Si des modifications sont apportées aux conditions de l'essai,
- En cas de modification de la composition ou de la technologie de fabrication du produit.
Lors de l'essai de validation, l'activité antimicrobienne du produit est évaluée en observant si les souches d'essai (100 UFC au maximum) se multiplient ou non en présence du produit. Si les souches d'essai ne se multiplient pas en présence du produit, cela signifie que l'activité antimicrobienne n'a pas été neutralisée et que la validation doit être répétée dans des conditions d'essai modifiées.
Services de tests de stérilité conformes aux bonnes pratiques de laboratoire (GLP) avec Nano-Test
La garantie de la stérilité de vos produits pharmaceutiques ne dépend pas seulement d'une méthode d'essai appropriée, mais aussi du fait que cet essai soit réalisé dans un laboratoire accrédité, conformément aux principes des BPL et de manière vérifiable. Grâce à sa gamme complète de services microbiologiques dans ce domaine, Nano-Test est un partenaire fiable pour l'industrie pharmaceutique.
Nano-Test – Cahier des charges
Nano-Test bietet GLP-konforme Sterilitätstests (Sterility Test) für pharmazeutische Produkte an. Unsere Analysen werden in voller Übereinstimmung mit den Normen Ph. Eur. 2.6.1, USP <71> und ISO 11737-2:2019 durchgeführt[reference:15].
Notre gamme de services :
- Procédé de filtration sur membrane : le procédé privilégié pour les produits filtrables ; pour les produits antimicrobiens, avec des protocoles de lavage adaptés.
- Procédé de vaccination directe : procédé alternatif pour les produits non filtrables ; élimination de l'activité antimicrobienne par dilution ou inactivation.
- Validation de l'adéquation de la méthode : évaluation de l'activité antimicrobienne spécifiquement pour la matrice de votre produit et démonstration de l'adéquation de la méthode.
- Contrôle qualité des milieux de culture : confirmation des propriétés favorisant la croissance des milieux de culture au moyen d'un test de stimulation de la croissance.
- Contrôle négatif : réalisation simultanée de contrôles négatifs appropriés dans chaque série de tests.
- Rapports : rapports conformes aux principes GLP, audités et acceptés par les autorités de contrôle.
Tous nos travaux sont réalisés dans des conditions aseptiques, tout en garantissant l'intégrité des données (principes ALCOA+).
Avantages du test de stérilité de Nano-Test :
- Accréditation BPL : laboratoire de microbiologie doté d'une déclaration de conformité aux BPL de l'OCDE.
- Pharmakopöe-Konformität: Vollständige Konformität mit den Standards Ph. Eur. 2.6.1, USP <71> und ISO 11737-2.
- Une expertise dans deux méthodes : la filtration sur membrane et l'inoculation directe.
- Assistance à la validation : démonstration de la validité du test grâce à une validation de méthode adaptée à votre produit.
- Rapports rapides : résultats des tests de stérilité standard disponibles dans un délai de 3 à 5 jours ouvrés après l'incubation.
- Une équipe d'experts : une équipe expérimentée en microbiologie pharmaceutique et en validation des BPL.
Le contrôle de stérilité des produits pharmaceutiques constitue la dernière étape de contrôle garantissant la sécurité des patients. Le choix de la méthode appropriée (filtration sur membrane ou inoculation directe), la mise en œuvre rigoureuse de la validation de la méthode et la réalisation du test dans des conditions aseptiques, conformément aux principes des BPL, sont indispensables à la validité des résultats et à leur reconnaissance par les autorités.
Grâce à son infrastructure conforme à la pharmacopée, à son accréditation BPL et à son personnel spécialisé, Nano-Test répond pleinement aux exigences des fabricants pharmaceutiques en matière de tests de stérilité. Collaborez avec Nano-Test pour attester de la stérilité de vos produits et accélérer votre processus d'autorisation de mise sur le marché.