OECD TG 474 ist der Standard „Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test“, d. h. der Mikronukleustest an Säugetier-Erythrozyten, der in Abschnitt 4 (Gesundheitseffekte) der OECD-Prüfrichtlinien für die Prüfung von Chemikalien enthalten ist. Die aktuelle Fassung der OECD-Prüfrichtlinie Nr. 474 ist ein international anerkanntes Prüfverfahren zur Bewertung des in-vivo-Genotoxizitätspotenzials von Chemikalien und anderen Prüfsubstanzen.
Das Grundprinzip des Tests beruht auf dem Nachweis der Bildung von Mikronuklei in Erythrozyten, die im Knochenmark oder im peripheren Blut vorkommen. Mikronuklei sind kleine, kernähnliche Strukturen, die während der Zellteilung aus exzentrischen Chromosomenfragmenten oder verspätet eintreffenden vollständigen Chromosomen entstehen, die nicht in den Hauptkern aufgenommen werden. Daher ermöglicht der Test die Ermittlung sowohl von klastogenen als auch von aneugenischen Wirkungen.
Bei den Erythrozyten werden zwei grundlegende Zellpopulationen untersucht:
- PCE (Polychromatische Erythrozyten): Junge, RNA-reiche, polychromatische Erythrozyten
- NCE (normochromatische Erythrozyten): Reife, normochromatische Erythrozyten
Ein Anstieg des Anteils an PCE mit Mikronuklei ist der wichtigste Indikator für eine genotoxische Wirkung. Das PCE/NCE-Verhältnis liefert hingegen Informationen über eine zytotoxische Wirkung oder eine Suppression des Knochenmarks.
Das Testsystem wird in der Regel an Mäusen oder Ratten durchgeführt. Dabei können Knochenmark und/oder peripheres Blut verwendet werden. Da bei Ratten die Erythrozyten mit Mikrokernen im peripheren Blut schnell von der Milz entfernt werden können, ist die Untersuchung des Knochenmarks möglicherweise besser geeignet; bei Mäusen ist die Verwendung von peripherem Blut weit verbreitet. Die Auswertung kann mikroskopisch oder mittels Durchflusszytometrie erfolgen.
Warum wird er durchgeführt?
Die OECD TG 474 wird zu folgenden wissenschaftlichen und regulatorischen Zwecken durchgeführt:
Identifizierung genotoxischer Gefahren: Bestimmung des Potenzials der Testsubstanz, Schäden an der Chromosomenstruktur oder der Chromosomenzahl zu verursachen
Nachweis klastogener und aneuogener Wirkungen: Bewertung von Chromosomenbrüchen und Veränderungen der Chromosomenzahl unter in-vivo-Bedingungen
Validierung von In-vitro-Testergebnissen: In-vivo-Nachverfolgung von Stoffen, bei denen in In-vitro-Genotoxizitätstests positive oder verdächtige Ergebnisse erzielt wurden
Unterstützung von Zulassungsunterlagen: Verwendung bei Sicherheitsbewertungen von Chemikalien, Arzneimitteln, Pestiziden, Biozidprodukten, Medizinprodukten und biotechnologischen Produkten
Beitrag zur Risikobewertung: Interpretation des genotoxischen Risikos in Verbindung mit Expositionsszenarien
- Product Safety and Quality Assurance: Documentation of the biosafety profile of raw materials, intermediates, or finished products
OECD TG 474 ist kein eigenständiger Karzinogenitätstest. Er dient der Ermittlung eines genotoxischen Risikos; die Ergebnisse müssen in Verbindung mit anderen Genotoxizitätstests, physikalisch-chemischen Daten und einer Expositionsbewertung interpretiert werden.
Als Nano-Test führen wir die Untersuchungen im Rahmen der OECD TG 474 mit wissenschaftlicher Sorgfalt auf der Grundlage unserer akkreditierten Laborinfrastruktur und unseres Qualitätsmanagementsystems durch. Unser Leistungsumfang umfasst Folgendes:
Study Design and Protocol Development
- Erstellung eines Versuchsprotokolls gemäß OECD TG 474
- Determination of the dosage range and establishment of the main experimental design based on the physicochemical properties of the test substance
- Festlegung von Negativkontrollen, Lösungsmittelkontrollen und geeigneten Positivkontrollgruppen
- Wissenschaftliche Begründung der Verabreichungswege, Dosierungen und Probenentnahmezeitpunkte
- Compliance with Ethical Review and Animal Welfare Requirements
Für weitere Informationen zu Versuchsplanung, Probenannahmebedingungen und Berichtsprozessen im Rahmen Ihrer Studien gemäß OECD TG 474 können Sie sich gerne an Nano-Test wenden.